论文部分内容阅读
目的:本实验旨在研究Egr-1基因的慢病毒沉默改变肝癌细胞放射敏感性，并探讨Egr-1基因在放射治疗中增加放射敏感性上的积极作用。 方法:选取肝癌细胞HepG2细胞和SMMC-7721细胞，采用慢病毒基因沉默技术，分别沉默HepG2细胞和SMMC-7721细胞的Egr-1基因得到HepG2-2294细胞和SMMC-7721-2294细胞。荧光倒置显微镜及荧光定量PCR方法测定转染效率及基因抑制率。应用克隆形成实验得出各种细胞的存活分数，利用多靶单击模型拟合剂量-存活曲线和各种放射敏感性参数，比较细胞之间放射敏感性。给予细胞照射剂量为5Gy的X射线放射，荧光定量PCR检测放射前后Egr-1基因的mRNA表达水平，比较射线诱导Egr-1基因表达增加量。 结果:慢病毒沉默HepG2细胞和SMMC-7721细胞的Egr-1基因，转染效率分别为83％和65％，mRNA表达抑制率分别为74.9％和47.0％，抑制效果显著(P＜0.001)。HepG2细胞与SMMC-7721细胞的放射敏感性相关参数(D0、Dq、N和SF2)进行比较，HepG2细胞放射敏感性高于SMMC-7721细胞(P＜0.001)。HepG2细胞与HepG2-2294细胞的放射敏感性相关参数（D0、Dq、N和SF2）进行比较，HepG2细胞转染抑制后形成的HepG2-2294细胞放射敏感性降低(P＜0.001)。SMMC-7721细胞与SMMC-7721-2294细胞的放射敏感性相关参数（D0、Dq、N和SF2）进行比较，无明显差异(P=0.061)。HepG2细胞和SMMC-7721细胞在射线照射1h后均诱导了Egr-1基因表达水平的增高，增高比分别为△Egr-1HepG2,8.754±0.661;△Egr-1 SMMC-7721,1.526±0.173。HepG2细胞比SMMC-7721细胞增高显著(P＜0.001)，放射诱导Egr-1基因表达的作用在HepG2细胞要比SMMC-7721细胞明显。放射可诱导细胞Egr-1基因表达，但不同细胞诱导表达作用强弱不同，在诱导作用强的细胞沉默Egr-1基因改变细胞放射敏感性，在诱导作用弱的细胞沉默Egr-1基因放射敏感性改变不显著，细胞放射敏感性同射线诱导细胞表达Egr-1基因的强度有关。 结论:本实验通过慢病毒基因沉默的方法验证在HepG2细胞中降低Egr-1基因表达可以降低细胞放射敏感性，但在SMMC-7721细胞中并不能改变肿瘤细胞放射敏感性，这跟射线诱导Egr-1基因表达作用的强弱有关。