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四川冬菜是我国传统的地方性腌制食品,因其风味独特、食用方式多样而深受广大消费者喜欢。四川冬菜生产采用纯手工,产品3-4年成熟时期完全在自然条件下进行,生产周期长,产品品质不稳定,生产产量低是限制冬菜产业发展的主要因素。腌制蔬菜中有着非常复杂的菌相组成,而微生物类群对腌制蔬菜的品质具有重要影响。通过免培养法ARDRA对四川冬菜中细菌菌相进行研究,初步了解4年腌制的冬菜中细菌菌相,然后根据分析结果用传统培养方法对冬菜中的细菌进行分离鉴定。主要研究成果如下:(1)免培养法分析:腌制4年的四川冬菜中细菌属于变形杆菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)下的8个属,变形杆菌占细菌克隆文库的87.9%是优势菌类群,厚壁菌门和放线菌门仅占12.1%。未可培养菌是样品中主要细菌,占克隆文库的87.1%。(2)免培养法分析检测出样品中可分离得到纯培养的菌主要有:假单胞杆菌(Pseudomonas)、盐单胞菌(Halomonas)、嗜冷杆菌(Psychrobacter)、节杆菌(Arthrobacter agilis)、乳杆菌(Lactobacillus)、盐水球菌(Salinicoccus)、海球菌(Marinococcus)、枝芽孢杆菌(Virgibacillus)。有1个克隆子为乳杆菌(Lactobacillus),2个克隆子为盐水球菌(Salinicoccus),其余菌株均只有一个克隆子。(3)培养法分析结果表明,冬菜中细菌属于厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria)下5个属,枝芽孢杆菌属(Virgibacillus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、糖球菌属(Gracilibacillus)、芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、细杆菌属(Microbacterium),分离到的优势菌是枝芽孢杆菌属(Vrgibacillus),占分离菌株的65.7%;其次为芽孢杆菌(Bacillus)(占14.3%),糖球菌属(Gracilibacillus)(占11.4%)。(4)冬菜中细菌多样性不高,但是存在枝芽孢杆菌属(Virgibacillus),海球菌属(Marinococcus),盐水球菌属(Salinicoccus),盐单胞菌属(Halomonas)和糖球菌属(Gracilibacillus)等中度嗜盐菌及芽孢杆菌属(Bacillus)的耐盐菌。中度嗜盐菌和耐盐菌对工业、农业、医药业及环境治理方面具有重要意义,因此四川冬菜中细菌具有研究利用价值。(5)克隆子H1、H83、H124、H143,分离菌株SCY4与NCBI基因文库中已提交的纯菌株序列相似性低于97%,其可能为新菌种。免培养法和培养法得到的结果不完全一样,二种方法各有优缺点,只有通过两种方法相结合,才能更加全面的反映样品中细菌组成。