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高效液相色谱和毛细管电泳是两种有效的分离测定技术,而荧光检测器是色谱最常用的检测器之一。将高效液相色谱、毛细管电泳与荧光检测技术相结合的方法由于具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点被广泛应用于生命科学、食品、环境等各个研究领域。γ-氨基丁酸类药物如加巴喷丁(GBP)、巴氯芬(BAL)、γ-氨基丁酸(GABA)等物质是在临床上应用较多的一类抗癫痫或治疗骨骼肌松弛的药物。γ-氨基丁酸类药物本身并没有荧光,无法直接用荧光检测器检测。若采用荧光衍生试剂对其进行衍生,使之转变成具有较强荧光的物质,可达到灵敏检测的目的。本论文选择了两种性能优良的荧光衍生试剂5-(4,6-二氯-s-三嗪-2-氨基)荧光素(DTAF)以及6-氧-(N-琥珀酰亚胺乙酸酯)-9-(2’-甲氧羰基)荧光素(SAMF),使之与γ-氨基丁酸类药物反应,进行标记后用高效液相色谱或毛细管电泳进行分析测定,完成了以下四个方面研究工作:(1)以本实验室合成的SAMF作为柱前衍生试剂,分别用高效液相色谱分离、紫外-可见(HPLC-UV-Vis)和荧光检测(HPLC-FLD)分析尿液和血液中的巴氯芬。在硼酸-硼砂缓冲溶液(pH=8.0)中,室温(25°C)下衍生15min后用色谱分离。HPLC-UV-vis法的线性范围为3×10-8mol L-1-5×10-6mol L-1,检测限为5×10-9mol L-1;HPLC-FLD的线性范围为1×10-10mol L-1-1×10-6mol L-1,检测限为5×10-10mol L-1。将该方法用于尿液和血液中巴氯芬含量的测定,结果令人满意。(2)以DTAF作为柱前衍生试剂,分别建立了毛细管电泳分离-激光诱导荧光(CE-LIF)和固相萃取-毛细管电泳分离-激光诱导荧光(SPE-CE-LIF)分析测定血浆中巴氯芬的两种方法。研究表明,在硼砂缓冲溶液(pH=9.0)介质中,40°C下45min即可完成衍生反应。在CE-LIF中,以γ-氨基丁酸做内标,20mmol L–1的硼砂缓冲溶液(pH=9.5)为背景电解质,分析物与内标的衍生产物峰在16min内达到基线分离,检出限为5×10-10mol L–1。在SPE-CE-LIF中,以二氯荧光素作为内标,40mmol L–1的硼砂缓冲溶液(pH=9.5)为背景电解质,衍生产物与内标的峰在22min内达到基线分离,检出限为1×10-11mol L(–1)。将新建立的方法用于血浆中巴氯芬分析测定,回收率为91.2-101.3%,结果令人满意。(3)采用SAMF、FITC、DTAF三种衍生试剂对三种γ-氨基丁酸类药物进行衍生,用CE-LIF进行分离测定,并详细比较了三种试剂在衍生条件、检测灵敏度方面的性能。研究表明,SAMF具有衍生条件温和、灵敏度高等优点。因此,以SAMF作为柱前衍生试剂,建立了SPE-CE-LIF分析测定血浆中加巴喷丁、巴氯芬和γ-氨基丁酸的新方法。当发射波长为473nm时,线性范围为4×10-10mol L-1-4×10-8mol L-1,检测限在2×10-11-3×10-11mol L-1之间(S/N=3)。将该方法用于血浆中加巴喷丁、巴氯芬、γ-氨基丁酸含量的测定,效果令人满意。(4)以DTAF为衍生试剂,建立了CE-LIF分析巴氯芬对映异构体的新方法。研究表明,在40mmol L-1的硼砂缓冲溶液(pH=9.0)中,45°C下40min即可完成衍生反应。以含有2mmol L-1羟丙基-β-环糊精的40mmol L-1硼砂缓冲溶液(pH=9.6)作为背景电解质,对映异构体衍生物在20min内达到分离,检出限为6×1010mol L-1。将新建立的方法成功地用于血浆以及药片中巴氯芬对映异构体的分析测定。