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本文概述了血小板活化因子拮抗剂银杏内酯B的研究发展状况,建立了用GC-MS法测定比格犬血浆中银杏内酯B含量的分析方法,考察了该方法的特异性、标准曲线和定量范围、精密度与准确度、样品稳定性、回收率等指标,测定了比格犬血浆中银杏内酯B的血药浓度,估算和评价了比格犬体内的药代动力学参数,为指导临床安全、合理用药,初步提供了科学的理论依据。
GC-MS法测定比格犬血浆中银杏内酯B含量的基本程序为,取健康成年比格犬18条,随机分成3组,每组6头,设高(2 mg/kg)、中(1 mg/kg)、低(0.5 mg/kg)3个剂量组,按设定的剂量快速从犬前肢内侧皮下静脉注射给药,分别于静注后1、5、10、15、20、30、45、60及90分钟,经前肢静脉采血2.5~3ml,2000rpm离心10分钟,制备出肝素抗凝血浆,-20℃保存待用。将冰冻的血浆样品室温静置融化,取0.5ml置10ml带盖玻璃离心管,加入0.5ml乙酸乙酯,旋涡振荡1分钟,2000rpm离心10分钟,取上层有机相置10ml带盖玻璃离心管,再用同量乙酸乙酯提取2次,合并提取液,45℃水浴氮气吹干,加入100μ l BSTFA衍生化试剂于70℃衍生60分钟,取2μl作GC-MS测定,记录色谱峰面积,然后代入工作曲线算得各时间点比格犬血浆中银杏内酯B的含量。色谱柱的进样口温度为250℃,接口温度250℃,柱温自100℃开始以30℃/分钟的速率升至290℃,保留10分钟,扫描质量625,毛细管色谱柱规格30m×0.25mm,载气是氦气,柱流速1.5ml/分钟。
银杏内酯B的血浆药物浓度在10~2000ng/ml时,线性关系良好(r=0.998),平均回收率达86.9%~89.8%,日内相对偏差范围为6.0%~11.6%,日间相对偏差范围为7.4%~12.0%。从色谱图可以看出,该方法测定银杏内酯B的血浆杂质不干扰测定,专一性强,平均回收率高,稳定性良好,灵敏度较高,是测定银杏内酯B的较好的方法。比格犬静脉分别注射银杏内酯B0.5、1、2mg/kg时,其分布半衰期t1/2分别为4.0、2.3、1.8分钟,消除半衰期t1/2β分别为24.9、26.7、19.3分钟,分布容积Vc分别为1114、1026、1003 ml/kg,清除率CL分别为73.6、81.1、130.9L/kg/min,药时曲线下面积AUC(0-t)分别为5.9、11.0、13.2μg.min/L;比格犬静脉注射银杏内酯B后,药时曲线符合二室模型,呈快速分布,消除迅速。