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第一部分建立符合视网膜新生血管及血管发育状态的小鼠模型背景及目的：氧诱导视网膜病变(Oxygen-induced retinopathy, OIR)动物模型的基本病理改变是在高氧环境下,未发育完全的视网膜血管闭塞,相应的视网膜缺血、缺氧,进而导致视网膜新生血管(Retinal neovascularization, RNV)形成。该模型符合RNV及血管发育状态,其表现类似于早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity, ROP)。Smith的方法具有较好的可行性和重复性。因此本研究采用OIR小鼠模型构建RNV和视网膜血管发育状态。方法：7日龄C57BL/6J幼鼠14只置于75%±2% 浓度的高氧容器内连续饲养5天,随后在正常空气环境中饲养5天,作为OIR模型组;同龄C57BL/6J幼鼠10只在正常空气环境中饲养至17日龄作为空气对照组。两组小鼠分别行心脏FITC-dextran灌注及视网膜铺片,比较视网膜总面积、无灌注区面积、灌注区微血管网密度、新生血管簇面积、静脉扩张、动脉迂曲程度的差异；行眼球切片HE染色后比较突破内界膜的内皮细胞核的数目。结果：与空气对照组比较,OIR模型组17日龄小鼠表现为视网膜总面积减小(60.7±1.5×105个像素值vs.54.5士5.2×105个像素值,P=0.0004)、后极部无灌注区面积扩大(0±0%vs.25.5±5.4%,P<0.0001),灌注区的微血管网密度异常增高(30.9±1.7%vs.48.6±4.9%,P<0.0001),视网膜灌注区与无灌注区交界处新生血管簇面积扩大(0±0% vs.2.6±1.3%,P<0.0001),静脉明显扩张(9.2±0.9个像素值vs.17.0±1.5个像素值,P<0.0001),动脉明显迂曲(1.02±0.01vs.1.14±0.04,P<0.0001)。与空气对照组比较,OIR模型组突破内界膜的内皮细胞核数目增多(0.6±1.1 vs.49.6±6.8,P<0.0001)。结论：该模型符合RNV及视网膜血管发育状态,重复性好,可定量分析氧诱导视网膜病变严重程度和视网膜血管发育状态。第二部分Ang/Tie2与VEGF/VEGFR信号通路对视网膜新生血管及血管发育的作用研究背景及目的：血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)及其受体(Vascular endothelial growth factor receptor, VEGFR)与血管生成素(Angiopoietin, Ang)及其受体(Tyrosine kinase with immunoglobulin like and epidermal growth factor homology domains-2, Tie2)是目前得到确认的最重要的血管生长相关因子。游离的Tie2融合蛋白(Soluble sTie2 fusion protein, sTie2-Fc)和血管生成素-1(Angiopoietin-1, Ang1)可拮抗血管生成素-2 (Angiopoietin-2, Ang2)的促新生血管作用。雷珠单抗(Ranibizumab,商品名Lucentis)是FDA批准的抗VEGF单克隆抗体。本研究分别随机单眼玻璃体腔注射磷酸盐缓冲溶液(Phosphate buffer saline, PBS)、sTie2-Fc、Angl、Ranibizumab、sTie2-Fc+Ranibizumab、Angl+Ranibizumab,比较各种处理方案对RNV和视网膜血管发育的作用。方法：7日龄C57BL/6J新生小鼠82只,分6组(C组14只、D组14只、E组13只、F组14只、G组14只、H组13只),置于氧浓度75-/-2%浓度的容器内连续饲养5天,至小鼠12日龄时出氧箱,测量记录小鼠体重,随机单眼玻璃体腔内注射PBS (1μ1) (C组)、sTie2-Fc(1μ1含0.05l,tg)(D组)、Angl (1μ1含0.05μg)(E组)、Ranibizumab(1μl含5μg)(F组)、sTie2-Fc+Ranibizumab(1μl含sTie2-Fc0.05μg和Ranibizumab 5μg)(G组)、Ang1+Ranibizumab(1μl含Angl 0.05μg和Ranibizumab 5μg)(H组)。再置于空气环境中饲养至17日龄,再次测量记录小鼠体重,然后处死。每组小鼠分别行心脏FITC-dextran灌注及视网膜铺片和眼球切片HE染色。结果：1.与PBS组比较,sTie2-Fc组、Ang1组、Ranibizumab组、sTie2-Fc+ Ranibizumab组和Angl+Ranibizumab组铺片中新生血管的面积均减小(P值分别为<0.0001、<0.0001、<0.0001、<0.0001和<0.0001),切片中突破内界膜的内皮细胞核数目亦减少(P值分别为<0.0001、<0.0001、<0.0001、<0.0001和<0.0001)；sTie2-Fc+Ranibizumab组和Angl+Ranibizumab组对RNV的抑制作用增强。2.与PBS组比较,sTie2-Fc组,Ang1组,Ranibizumab组和Angl+Ranibizumab组铺片中无灌注区的面积均缩小(P值分别为<0.0001、0.003、0.01和0.01),灌注区的微血管网密度均降低,其中sTie2-Fc组的无灌注区面积明显小于其他各组；sTie2-Fc+ Ranibizumab组的无灌注区面积大于PBS组,灌注区的微血管密度进一步降低。3Ranibizumab组的视网膜总面积(P值分别为<0.0001、0.02、<0.0001、0.003和<0.0001)和出生第17天的体重(P值分别为<0.0001、0.008、0.001、0.01和0.02)明显低于其他各组。结论：单独玻璃体腔注射sTie2-Fc、Ang1或Ranibizumab均可抑制RNV,不影响视网膜血管发育,其中sTie2-Fc甚至可以促进视网膜血管发育的进行。联合玻璃体腔注射sTie2-Fc+Ranibizumab或Ang1+Ranibizumab,增强抑制RNV的作用,但是前者明显抑制视网膜血管发育,后者的影响较小。因此,应用sTie2-Fc调控Ang/Tie2信号通路可能是抑制RNV更好的选择,应用Ang1+Ranibizumab联合调控Ang/Tie2和VEGF/VEGFR信号通路,可能更安全。