【摘 要】
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研究目的:马拉色菌,一种担子菌门酵母真菌,是皮肤常驻菌。研究报道,马拉色菌参与很多炎症性皮肤病的发生发展过程。脂溢性皮炎是一种慢性、复发性和炎症性皮肤病,头屑则是轻型的脂溢性皮炎,疾病发病率高且累及人群范围广。本课题组前期报道除了马拉色菌、表皮葡萄球菌在脂溢性皮炎中发挥一定的作用,其他相关临床研究也证实了表皮葡萄球菌的高定植。本研究旨在建立马拉色菌和表皮葡萄球菌的小鼠皮炎模型,并探讨具有抗微生物和
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研究目的:马拉色菌,一种担子菌门酵母真菌,是皮肤常驻菌。研究报道,马拉色菌参与很多炎症性皮肤病的发生发展过程。脂溢性皮炎是一种慢性、复发性和炎症性皮肤病,头屑则是轻型的脂溢性皮炎,疾病发病率高且累及人群范围广。本课题组前期报道除了马拉色菌、表皮葡萄球菌在脂溢性皮炎中发挥一定的作用,其他相关临床研究也证实了表皮葡萄球菌的高定植。本研究旨在建立马拉色菌和表皮葡萄球菌的小鼠皮炎模型,并探讨具有抗微生物和抗炎性质的非甾体类乳膏的治疗作用。研究方法:1、建立糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌感染小鼠模型。模型组小鼠先用胶带粘贴破坏皮肤屏障,然后将橄榄油重悬的两种菌（10^9cfu/ml）用无菌注射器涂抹于小鼠背部皮肤。对照组小鼠只破坏皮肤屏障和涂抹橄榄油,不抹菌。肉眼观察两组的皮肤变化,根据红斑和脱屑进行两组评分统计;同时使用皮肤屏障功能检测仪测量两组间的皮肤屏障功能。取皮肤活检组织,活检组织一部分新鲜冻存,一部分福尔马林中固定并石蜡包埋。新鲜组织提取RNA、逆转录,进行荧光实时定量PCR检测炎症因子IL-6、TNF-a的表达差异并分析;石蜡包埋组织块进行HE染色及免疫组化染色,测量组织表皮厚度和检测炎症因子IL-6、TNF-a在蛋白层面的表达差异并分析。2、药物制备及抑菌测试:用磁力加热搅拌器制备含抗真菌（酮康唑）、抗细菌（醋酸氯已定）及抗炎有效成分（甘草酸苷）的不同浓度乳膏,用药敏纸片的方法进行体外细菌抑制实验及用系列浓度梯度稀释法进行体外真菌抑制实验,选择有效药物浓度的药膏。3、探究实验药膏的有效性:涂菌4天后,将感染糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌的小鼠分为治疗组和基质组。抹药第5天后,肉眼观察到皮损变化最明显时拍照记录、表型评分、测量皮肤屏障功能,取皮肤活检组织进行荧光实时定量PCR、福尔马林固定及石蜡包埋进行HE染色及免疫组化染色。研究结果:1.细菌抑制试验表明,与含药膏基质组相比,含0.2%或0.5%醋酸氯己定的乳膏对表皮葡萄球菌有抑制作用。2.连续外涂糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌4天后,小鼠背部皮肤红斑和脱屑较对照组显著增加;与外用药物基质后相比,外用实验药膏后小鼠皮肤脱屑减少,皮肤颜色恢复正常。皮肤屏障功能测量结果显示外涂糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌组小鼠较对照组小鼠透皮水丢失增加;与外用药物基质组相比,药物治疗后表皮含水量增加。皮肤组织HE结果显示,外涂糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌使小鼠表皮厚度增厚。与外用药物基质相比,外用含药物有效成分的药膏使小鼠表皮厚度呈恢复趋势。皮肤活检组织荧光实时定量PCR结果显示,与外用基质组相比,外用含药物有效成分的药膏使小鼠皮肤组织中炎症因子IL-6、TNF-a的m RNA表达降低。免疫组化结果示,外涂糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌使小鼠皮肤组织中炎症因子IL-6、TNF-a表达升高;而外用药膏后,IL-6、TNF-a表达降低。研究结论:1.外涂糠秕马拉色菌和表皮葡萄球菌可以使小鼠出现红斑和脱屑表现,小鼠表皮厚度增加;使小鼠皮肤屏障功能下降;使小鼠皮肤炎症因子IL-6、TNF-a在蛋白层面表达升高。2.外用实验药膏,与外用药膏基质相比,小鼠皮肤炎症得到缓解。
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