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研究背景及目的: 舌鳞状细胞癌是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤。多发生于舌缘处,肿瘤发生进展迅速,恶性程度高,浸润性生长,致舌运动受限。目前,临床以手术切除及术后放化疗为主要治疗手段,然而经过一系列临床治疗后,患者5年生存率还是低于50%。 维甲酸相关的孤儿受体α(RORα)是一种核受体,在哺乳动物中含量最高的转录调节因子之一。文献报道,RORα参与多项细胞生物功能,主要包括细胞分化,代谢,炎症,肿瘤和昼夜节律等。 然而,目前并无RORα与舌鳞状细胞癌发生发展的相关报道及研究,该实验的主要目的是研究探讨RORα的表达量与舌鳞状细胞癌发生发展的关系,研究RORα对舌鳞状细胞癌进展的调控机制,为舌鳞状细胞癌早期诊断及治疗提供新思路。 实验材料及方法: (1)实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测标本舌鳞状细胞癌原发灶组织与癌旁周围组织(距原发灶3cm的组织标本)中RORα的表达量,统计分析; (2)正常舌上皮原代细胞(OKCs)培养及免疫荧光鉴定; (3)实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测舌鳞癌细胞系SCC15、SCC25、CAL27与正常舌上皮原代细胞(OKCs)中RORα的表达量检测; (4)构建RORα过表达及沉默慢病毒载体,感染舌鳞癌细胞系,通过实时定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测RORα表达水平,稳筛细胞得RORα过表达及沉默的细胞系; (5)通过CCK-8实验、划痕实验以及迁移实验检测RORα表达改变后对舌鳞癌细胞系增殖、迁移等生物学行为能力的影响; (6)通过裸鼠皮下成瘤实验检测RORα表达改变后对裸鼠成瘤的影响; (7)转录组测序分析RORα沉默后转录组水平的改变,实时定量PCR筛选RORα调控舌癌进展的靶基因CDH8; (8)通过CHIP验证RORα结合CDH8从而调控舌鳞状细胞癌进展。 实验结果: (1)与舌癌癌旁周围组织相比,舌鳞状细胞癌组织中RORα的表达量明显降低; (2)OKCs表达舌上皮细胞特异性蛋白Cytokeratin19,不表达间质细胞特异性蛋白Vimentin; (3)舌鳞癌细系SCC15、SCC25、CAL27中RORα的表达量明显低于OKCs; (4)病毒感染及稳筛的RORα稳定过表达和沉默的细胞系; (5)沉默RORα后细胞增殖迁移能力加强,过表达RORα后细胞增殖迁移能力降低; (6)沉默RORα加速裸鼠皮下成瘤; (7)沉默RORα后CDH8的表达量明显降低; (8)RORα结合到CHD8启动子上,调控肿瘤发生发展。 研究结论: RORα在舌鳞状细胞癌标本及细胞系中表达量均下调,沉默RORα可使舌鳞癌细胞系的增殖速率加快、迁移能力加强,体内成瘤速率加快。在舌鳞癌细胞系中,验证了RORα能结合到CDH8的启动子区,调控下游基因的表达。本实验结果为舌鳞状细胞癌的早期诊疗提供新思路,对于进一步研究探讨及预防舌鳞状细胞癌提供了理论指导。