CD8+初始T细胞通过TCR(T cell receptor)识别抗原肽一MHC I类分子的第一信号和协同刺激分子或IL一2等第二信号的刺激而活化。活化后的CD8+T细胞作为重要的效应细胞之一大量克隆性增殖，通过分泌型(穿孔素和颗粒酶介导)和非分泌型(CD95／CD95L)两种机制特异性杀伤靶细胞，在抗感染免疫和抗肿瘤免疫中有重要的意义。大多数细胞表面表达MHC I类分子，活化的CD8+T细胞因而有导致组织损伤的潜在危险，很多研究发现CD8+T细胞参与器官特异性自身免疫病的发生和发展，比如胰岛素依赖性糖尿病，类风湿性关节炎，自身免疫性甲状腺炎，多发性硬化症等。大量克隆扩增的CD8+T细胞，因具有潜在自身反应性，必须被清除。 活化诱导的细胞死亡(activation-induced cell death，AICD)是机体清除活化T细胞，避免过强免疫应答和维持外周免疫耐受一种重要的负反馈机制。初始T细胞表面的TCR识别特异性的抗原后，通过CD3等分子传递活化信号，引起转录因子活化，促使一些基因开始转录。这些基因除了编码一些与T细胞增殖、分化、效应相关的分子外，还编码包括FasL在内的促进凋亡的分子。这些分子除了特异性杀伤靶细胞外，一个重要的功能是介导活化T细胞的凋亡，这种凋亡即活化诱导的细胞死亡。 凋亡(apoptosis)是一种受到多种基因精细调控的程序化细胞死亡。在细胞凋亡中，两个家族的分子非常重要，一个是TNF超家族及其受体，另外一个是Bcl-2超家族。TNF超家族中FasL和TRAIL在凋亡中的作用最为重要，Bcl-2超家族包括抗凋亡和促凋亡两个亚家族，促凋亡分子主要包括Bim、Bid、Bax等，抗凋亡分子主要包括Bcl-2和Bcl-XL。CD4+T细胞的AICD的机制研究已较深入，但参与CD8+T细胞AICD的过程的分子的研究尚待阐明，已有的研究表明除CD95／CD95L之外尚有其他分子参与该过程。近年来不断有新的凋亡相关基因被发现，它们在不同的水平调节细胞凋亡。HIPK2(Homeodomain-interactingprotein kinase 2)是1998发现的一种具有蛋白激酶活性的转录共阻遏因子，它通过调节多种转录因子活性，影响凋亡相关基因表达，促进细胞凋亡。那么它是否在CD8+T细胞的AICD中发挥作用呢?它的作用是否与调节其他凋亡相关基因的表达相关呢?基于以上的考虑，我们进行了一下的研究： 1．以抗CD3单克隆抗体诱导CD8+T杂交瘤细胞的AICD为模型。实时定量RT-PCR检测Bcl-2家族分子表达未见明显改变(p>0．05)，提示其可能不参与CD8+T细胞的AICD。FasL的表达有一定程度的上调(p<0．05)，提示可能在CD8+T细胞的AICD中起一定作用。令人注目的是TRAIL与其受体DR5以及HIPK2的表达被显著上调(p<0．01)，提示他们可能在CD8+T细胞的AICD中起重要作用。 2．真核表达质粒转染CD8+T细胞，结果表明过表达TRAIL可以上调细胞凋亡水平(p<0．01)，但是HIPK2和DR5的表达水平未见明显改变(p>0．05)。通过siRNA下调TRAIL的表达，可以显著下调CD8+T细胞的凋亡(p<0．01)，HIPK2和DR5的表达水平未见明显改变(p>0．05)。提示TRAIL可能参与了CD8+T细胞的AICD，但是TRAIL对HIPK2和DR5的转录和表达无明显影响。 3．用反义技术下调CD8+T细胞的HIPK2的表达，可以明显抑制细胞凋亡(p<0．01)，TRAIL的表达水平未见改变(p>0．05)，但是DR5的表达被明显下调(p<0．05)。提示HIPK2可能通过下调DR5的表达，抑制细胞凋亡。真核表达质粒转染CD8+T细胞，结果表明过表达HIPK2不能上调细胞凋亡和TRAIL表达(p>0．05)，但是DR5的表达被明显上调(p<0．05)。提示HIPK2可以上调DR5的表达，但此时因配体TRAIL的表达未改变，故虽其受体DR5被上调，但是细胞凋亡水平没有明显改变。 4．进一步研究表明，CD8+T细胞中同时过表达TRAIL和HIPK2，与单独过表达HIPK2的细胞相比，虽DR5的表达水平二者没有明显差异(p>0．05)，但由于前者上调TRAIL(p<0．05)，故细胞凋亡水平明显升高(p<0．01)。与上述研究结果相验证的是，在siRNA下调TRAIL表达的CD8+T细胞中过表达HIPK2，虽DR5的表达水平被显著上调(p<0．05)，但细胞凋亡没有被明显改变(p>0．05)。 5．在其他的实验中，如在过表达TRAIL的细胞下调HIPK2的表达，或同时下调TRAIL和HIPK2的表达，都取得与上述实验相一致的结果。 6．进一步探讨了HIPK2调节DR5表达的机制。将HIPK2突变体转染CD8+T细胞，结果不能上调DR5的表达(p>0．05)。我们以及他人的研究结果显示过表达HIPK2可以增强p53的转录活性，同时p53的蛋白水平较对照组由明显的升高，已有研究发现转录因子p53激活可以上调DR5的表达，提示HIPK2可能会通过调节p53的转录活性，上调DR5的表达。人乳头瘤病毒18的E6蛋白可以促进p53蛋白的降解，因此我们构建了E6的真核表达载体pcDNA3-E6，将其转染过表达HIPK2的B3Z细胞，结果显示p53的蛋白水平较对照组显著降低，同时DR5的表达也被显著的下调(p<0．01)。 以上的研究，我们可以初步得到以下的结论： 1．TRAIL介导的凋亡途径在CD8+T细胞的AICD中有重要的作用。 2．HIPK2可能通过上调DR5的表达，参与调节TRAIL介导的CD8+T细胞AICD。 3．p53可能通过参与HIPK2介导的DR5上调作用，参与调节TRAIL介导 的CD8+T细胞的AICD过程。