SPINK6在不同细胞系中的表达和定位

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目的:本实验室通过基因芯片分析技术,分析了肝癌细胞及其细小病毒抗性株基因表达谱的差异,发现了在细小病毒抗性细胞株中Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂6(SPINK6)基因表达明显上调。但不清楚spink6基因在其他细胞系中的表达水平。本论文主要研究了spink6基因在不同肿瘤细胞和正常细胞系中的表达水平,并研究了SPINK6在细胞中的亚定位,对其作用机制可能有一定的揭示作用。方法:对多种肿瘤细胞和正常细胞抽取RNA,逆转录成cDNA后,通过半定量PCR和realtime-PCR的方法研究spink6在不同细胞系中的基因表达水平。根据realtime-PCR结果挑选了几株高表达spink6基因的细胞系进行免疫荧光实验,检测其在蛋白水平的表达,以及天然状态下SPINK6蛋白的定位。另外进一步通过构建pEGFP-N1-SPINK6载体,转染细胞后,使用DAPI标记细胞核,ER-Tracker Red标记内质网,Lyso-Tracker Red标记溶酶体,Dil标记细胞膜,共聚焦显微镜下观察SPINK6的细胞器亚定位。结果:半定量PCR和realtime-PCR的结果显示spink6在正常细胞中的表达水平高于肿瘤细胞中的表达水平。这一结果说明SPINK6可能是与肿瘤的恶性程度相关。通过细胞器亚定位的研究,发现SPINK6在内质网和细胞膜上均有定位,揭示了SPINK6可能是通过出膜发挥作用的。
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