日粮模式对瘤胃与后肠中生物胺生成的影响

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瘤胃液中生物胺主要是由相关瘤胃微生物产生的酶,或饲料原料中固有的酶,催化瘤胃液中游离氨基酸脱羧基生成。近年的研究表明,当反刍动物饲喂高精料日粮时,其日粮中可发酵碳水化合物和可降解蛋白会在瘤胃中微生物的作用下快速降解产生VFA和乳酸等酸性介质,从而破坏瘤胃正常的酸碱平衡,使瘤胃pH下降和屏障功能的破坏,进而使一些原来不容易通过瘤胃上皮的机体异常代谢物质相对较容易的通过上皮屏障进入血液,进而对动物机体产生危害。另外,精料快速发酵产生的酸性介质会改变瘤胃内的微生物区系,使产生生物胺的微生物菌群数量增加,进而使瘤胃液中生物胺含量增加,而瘤胃上皮屏障的受损,可能会使进入血液中的生物胺的含量增加,为充分了解日粮精料对瘤胃及血液中生物胺含量的影响,为奶牛的科学饲喂提供理论依据。本论文首先建立了高效液相色谱法测定瘤胃液和血液中生物胺的方法,再通过普查试验测定了饲喂高精料奶牛血液中的生物胺含量。然后,比较了饲喂不同精粗比日粮的奶牛瘤胃发酵参数、产奶性能、瘤胃中产生生物胺细菌数量、采食量、以及瘤胃液、血液和粪中的生物胺含量的差异,以研究高精料日粮对瘤胃代谢、瘤胃上皮完整性和动物生产性能的影响。最后,我们通过测定饲喂不同精粗比日粮山羊瘤胃液、瘤胃静脉血、盲肠内容物和盲肠静脉血中生物胺含量的改变,以研究瘤胃上皮和盲肠上皮的完整性、以及生物胺吸收的肠道区段。1反相高效液相色谱法测定瘤胃液中的生物胺应用反相高效液相色谱法,建立了瘤胃液中5种生物胺的测定方法。样品经0.5mol/L盐酸提取后,用丹磺酰氯柱前衍生,流动相为乙腈和0.1mol/L乙酸铵溶液,采用梯度洗脱,流速为1.0mL/min,紫外检测器波长254nm,柱温30℃。结果表明,采用该方法,色胺、腐胺、甲胺、组胺、酪胺五种生物胺能在40min内得到良好分离,回收率在88.46%-98.49%之间,相对标准偏差小于10%。应用上述方法,研究了高精料和低精料日粮条件下瘤胃液中5种生物胺浓度的差异。结果表明,在高精料日粮条件下,饲喂前山羊瘤胃液中的酪胺和甲胺浓度显著高于低精料日粮(P<0.05),但在组胺、色胺和腐胺浓度方面,二者未有显著性差异(P<0.05)。结果显示,该方法可用于瘤胃液中的生物胺的分析,且饲喂前山羊瘤胃液中的酪胺和甲胺浓度受日粮精粗比值的影响。2西岗、长丰和上海牧场奶牛静脉血中生物胺浓度及其与产奶量、乳成分及粪中VFA浓度的相关性研究为阐明我国当前主要饲养模式下奶牛血液中生物胺的含量及其与产奶量间的相关性。本试验选取,西岗、长丰和上海三个饲喂精粗比分别是65:35、70:30和60:40的牛场,分别采用颈静脉采集血液,同时收集粪便,采用高效液相色谱法测定其生物胺的含量,采用气相色谱法测定了挥发性脂肪酸的含量,同时针对生物胺与产奶量及VFA之间的相关性进行分析。试验结果表明,生产奶牛血液中存在一定浓度的生物胺;而相关性分析结果表明,奶牛血液中生物胺含量与产奶量、乳蛋白及乳脂率之间均不存在显著相关(P>0.05);除长丰和上海牧场粪便中的总VFA和乙酸,及长丰与西岗和上海的戊酸浓度差异显著(P<0.05)外,其它VFA在不同牧场间并不存在显著性差异(P>0.05),同时总挥发性脂肪酸及其组成与血液中生物胺量之间并不呈显著相关(P>0.05)。结果显示,在中国当前奶牛饲养模式下,奶牛血液中存在一定浓度的酪胺、腐胺、组胺、甲胺和色胺,其可能影响动物健康。3高精料日粮对奶牛瘤胃发酵及瘤胃液、外周血液和粪中生物胺含量的影响为研究饲喂高精料日粮条件下奶牛瘤胃液、外周血液和粪中生物胺含量和产生生物胺的微生物数量的改变,以及瘤胃发酵参数、瘤胃液pH与瘤胃液、血液和粪中生物胺含量的关系,试验选取4头初产(泌乳60-140d)的健康荷斯坦奶牛,采用2×2交叉试验设计。试验期为21d,包括:11d的适应期和10d的采样期。试验日粮为含40%(低精料组;对照组)和70%(高精料组)精料的日粮。在采样期的第1、4、6和10d采集瘤胃液用来测定pH、VFA、NH3-N、乳酸和生物胺的含量;另外在采样期的第1、4、6和10d的上午采食前15mmin和采食后4和8h通过尾静脉采血,测定生物胺含量;在采样期的第1、4、6和10d的饲喂前15min采集粪样,测定粪样中生物胺含量。结果显示,饲喂高精料显著提高了奶牛瘤胃液中乳酸、总VFA、丁酸、戊酸和总支链VFA的含量,同时乙丙比显著降低,但未能显著降低乙酸和NH3-N水平;同时,与饲喂低精料相比,饲喂高精料的奶牛的粪中和瘤胃液中的生物胺含量呈显著增加(P<0.05),同时外周血液中生物胺含量亦显著增加(P<0.05)。相关性分析结果表明:瘤胃液pH与瘤胃液、血液中生物胺含量,以及粪pH与粪中生物胺含量呈显著负相关(P<0.05),但瘤胃液pH和粪中生物胺含量无显著相关(P>0.05)。高精料日粮显著提高了瘤胃液中的乳酸菌数量(P<0.05),但对牛链球菌数量无显著影响(P>0.05)。结果表明:饲喂高精料能促进消化道内生物胺的生成与转移,提高乳酸菌数量。然而,有关生物胺和生物胺生成菌在动物生理活动中的作用,特别是在炎症应答中的作用,尚需进一步研究。4高精料日粮对山羊瘤胃、瘤胃静脉、盲肠与盲肠静脉中生物胺浓度的影响研究为研究高精料日粮对瘤胃液和瘤胃静脉血、盲肠内容物和盲肠静脉血中生物胺含量的影响,同时探讨二者的相关性。本研究以山羊为模型动物,实验选用6头装有永久性瘘管的本地阉割山羊,采用随机区组试验设计,每组随机选取3只山羊,实验期为24天。在试验期第22与23天,分别在0、2、4、6、8、10和12h采集瘤胃液测定pH、VFA和生物胺含量,第24天屠宰采集瘤胃静脉血、盲肠静脉血、瘤胃液和盲肠内容物,分测生物胺和VFA含量。结果显示,与低精料相比,饲喂高精料日粮的山羊瘤胃液中的酪胺、腐胺、组胺、甲胺、色胺、TVFA、乙酸、丁酸、戊酸和总支链脂肪酸显著性增加(P<0.05),而pH和乙丙比显著性降低(P<0.05);同时瘤胃液、瘤胃静脉血、盲肠内容物和盲肠静脉的生物胺含量显著提高;饲喂高精料日粮的山羊盲肠内容物中的总支链VFA、乙酸和丙酸浓度与低精料相比显著性增加(P<0.05),总VFA和戊酸含量呈增加趋势(P=0.073和P=0.086),而乙丙比呈降低的趋势(P=0.055);相关性分析结果表明,除盲肠内容物中的腐胺含量与盲肠静脉血中的组胺含量的相关性不显著外(P>0.05),瘤胃液与瘤胃静脉血、盲肠内容物与盲肠静脉血中的生物胺含量呈显著相关(P<0.05)。结果说明日粮精粗比可显著影响瘤胃液pH,瘤胃液和盲肠内容物中的生物胺可通过瘤胃壁和盲肠壁进入血液。
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