论文部分内容阅读
特发性肺纤维化(IPF)是一种特殊类型的、原因不明的、以慢性炎症损伤及肺间质过度纤维沉积为特征的间质性肺炎,主要发生于老年人,病变局限于肺,其组织病理学或/和HRCT表现为UIP。本病预后不良,病死率高,随着疾病的进展,最终可能发展为呼吸衰竭而导致死亡。目前IPF尚无特异的治疗方法,当前临床使用的药物治疗效果都十分有限,而中医药治疗IPF表现出显著优势,已经逐渐成为研究热点。本研究分为三部分:第一部分为文献研究,主要阐述了IPF的中西医研究概况以及TGF-β/Smad通路及其介导的上皮间质转化(EMT)在IPF中的作用;第二部分为临床观察研究,探讨了IPF的中医证候分布及其与HRCT的关系,验证了养阴益气合剂的临床适应性;第三部分为动物实验研究,从TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导EMT角度探讨了养阴益气合剂干预博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的疗效。研究目的收集IPF患者临床资料,探讨IPF的中医证候分布及其与HRCT关系,验证养阴益气合剂治疗IPF临床适用性;通过动物实验,从TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导EMT角度,研究养阴益气合剂干预博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的疗效。研究方法临床观察:参照IPF的诊断标准,制定肺间质纤维化临床观察表,收集120例IPF患者的四诊信息及临床资料,采用SPSS20.0统计软件,通过因子分析法,探讨IPF患者中医证候分布并探讨其与HRCT相关性,验证养阴益气合剂治疗IPF临床适用性。动物实验:将120只大鼠分为6组:空白组、模型组、泼尼松组及养阴益气合剂低、中、高剂量组。通过气管内滴注3mg/kg博来霉素建立肺纤维化大鼠模型,分别以相应药物进行干预,14天及28天时随机分批进行动物处理及取材。观察对比大鼠生长状态、体重及肺肉眼下形态,光镜下观察HE和Masson染色切片比较大鼠肺组织病理变化,ELISA法检测肺纤维化大鼠模型血清TGF-β1、CTGF、IL-18及HYP含量,RT-PCR法检测TGF-β1及其受体TβRI、TβRII、Smad3、Smad7以及α-SMA、E-cadherin、LN、Collagen I mRNA表达。研究结果1、特发性肺纤维化中医证候1.1一般资料:120例IPF患者的HRCT评分与mMRC呼吸困难指数、症状总积分显著正相关(P<0.05)。1.2中医证候:本次研究中120例IPF患者,通过因子分析法最终得到6个证型,其中气虚型患者分布比例最大,约占42.5%,其次为阴虚证,后依次为血瘀证>痰湿证>痰热证>阳虚证。从证型分布来看,本病多为本虚标实之证,本虚表现为气虚、阴虚、阳虚,标实为血瘀、痰湿、痰热,其中以气虚、阴虚为最常见证型。阳虚型HRCT评分显著高于气虚型、阴虚型IPF患者(P<0.05)。2、养阴益气合剂干预肺纤维化实验研究2.1肺组织病理结果HE及Masson染色显示:空白组大鼠肺脏结构正常,肺泡腔清晰可见,未见出血、渗出物及明显炎性细胞浸润。模型组大鼠可见肺泡腔塌陷变形、间隔水肿增厚,肺间质及肺泡可见明显的炎性细胞浸润,气管及肺泡周围可见大量纤维沉积。泼尼松组及养阴益气合剂低、中、高剂量组大鼠肺组织病理变化与模型组相似,但病变较模型组轻,但与空白组相比则有明显损伤,其中以养阴益气合剂中、高剂量组肺泡炎及肺纤维化程度最轻。HE染色显示第28天炎性细胞浸润较第14天明显减轻,Masson染色显示第28天胶原纤维沉积较第14天明显加重。2.2肺纤维化大鼠血清TGF-β1、CTGF、IL-18及HYP表达与空白组相比,模型组TGF-β1、CTGF、IL-18、HYP表达明显升高(P<0.01);泼尼松组和养阴益气合剂组TGF-β1、CTGF、HYP表达较模型组均显著下降(P<0.05,P<0.01),且从趋势上看,养阴益气合剂中、高剂量组治疗效果优于泼尼松组;各治疗组IL-18表达较模型组虽有所下降,但差异无统计学意义。2.3养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β/Smad信号通路影响与空白组相比,模型组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad3 mRNA表达显著升高,Smad7表达明显减少。治疗后,各治疗组TGF-β1、TβRI、TβRII、Smad3 mRNA水平较模型组下调(P<0.05,P<0.01),且养阴益气合剂中、高剂量组效果优于泼尼松组(P<0.05),尤以第28天明显;与模型组相比,各治疗组Smad7 mRNA表达显著上调(P<0.05)。2.4养阴益气合剂对肺纤维化大鼠TGF-β介导的EMT影响第14和28天时,与空白组相比,模型组大鼠α-SMA、Collagen I及LN mRNA表达均明显升高,而E-cadherin mRNA水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。各治疗组在给药14天后,α-SMA、Collagen I、LN mRNA表达出现减少趋势,以LN最为明显,Ecadhein表达较模型组有所增加;28天时,与模型组相比,各治疗组α-SMA、Collagen I、LN mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01),E-cadherin mRNA表达增多(P<0.05),且养阴益气合剂高剂量组治疗效果最佳。结论本次研究中120例IPF患者中,其HRCT评分与mMRC呼吸困难指数、症状总积分显著正相关。证候分布:气虚证>阴虚证>血瘀证>痰湿证>痰热证>阳虚证。气虚、阴虚为本病最常见证型,这与养阴益气合剂的益气养阴、活血化瘀的功效相适应。阳虚型IPF患者HRCT表现最严重。通过动物实验证实养阴益气合剂能够明显缓解博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型肺纤维化进展,其作用可能与抑制TGF-β/Smad信号通路及TGF-β介导的EMT有关;且养阴益气合剂中、高剂量组治疗效果优于泼尼松组。但养阴益气合剂对IL-18表达影响不显著。