论文部分内容阅读
目的：研究重组人血管内皮抑制素对宫颈癌Hela细胞体外增殖及侵袭能力的影响,探讨其机制及与VEGF、MMP-9的关系,从而为临床宫颈癌的靶向治疗提供一定的理论及实验依据。方法：1、采用MTT法测定不同浓度的重组人血管内皮抑制素(1、5、10、100μg /ml)作用24、48和72小时后对Hela细胞的体外抑制作用,并计算其抑制率。2、细胞划痕法观察1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml、重组人血管内皮抑制素组的细胞划痕24小时后迁移情况。3、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml重组人血管内皮抑制素处理Hela细胞24小时后提取RNA并用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法测定Hela细胞VEGF及MMP-9 mRNA表达。结果：1、MTT显示1、5、10、100μg/ml的重组人血管内皮抑制素作用24,48和72小时后细胞生长均受到不同程度的抑制,呈现剂量及时间依赖性,各实验组与对照组存在明显差异,(p<0.05)2、划痕24 h后对照组细胞已基本覆盖原划痕区,划痕宽度明显变窄。实验组(1、10、100μg/ml)随重组人血管内皮抑制素浓度的增大,Hela细胞向划痕区迁移距离逐渐缩小,与对照组存在显著差异。3、RT-PCR示各实验组(1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)VEGF mRNA的表达量随浓度增加逐渐下降,其灰度值(0.151±0.165、0.066±0.150、0.002±0.012)明显低于对照组(0.340±0.184)。MMP-9 mRNA的表达量亦随浓度的增加逐渐下降,其灰度值(0.759±0.006、0.561±0.007、0.198±0.025)亦明显低于对照组(1335±0.043)。各实验组与阴性对照组间及各实验组间相比,表达差异均有统计学意义(P<0.01)。结论：重组人血管内皮抑制素对宫颈癌Hela细胞体外增殖有抑制作用,呈时间及剂量依赖性。重组人血管内皮抑制素可抑制Hela细胞的迁移,并能抑制Hela细胞VEGF、MMP-9 mRNA的表达。据此推测重组人血管内皮抑制素可能是通过抑制与肿瘤转移相关的因子,VEGF、MMP-9的表达,来抑制宫颈癌的侵袭转移。