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99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv的制备和其在荷瘤鼠SPECT显像中的初步实验研究目的:制备并鉴定99m Tc标记VCAM-1单链抗体,用于小鼠肿瘤模型的显像,探讨作为肿瘤显像剂的可行性。方法:(1)99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv制备和鉴定:首先将HYNIC与VCAM-1蛋白在酸性环境下反应2h;再将产物过滤后在还原剂条件下与新鲜99m Tc O4-淋洗液反应30min。取少量反应产物做放射薄层层析测量标记率;使用PD-10柱子进行纯化,并用放射薄层层析法测量放化纯。(2)培养VCAM-1表达不同的三种肿瘤细胞(786-O、SK-OV-3和HT-1080),使用Western Blot和免疫组化检测三种细胞VCAM-1的表达。(3)细胞实验:三种细胞的细胞摄取实验和细胞流出实验。(4)99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv在正常小鼠和肿瘤模型裸鼠中的生物分布和SPECT显像:建立786-O、SK-OV-3和HT-1080细胞荷瘤鼠模型,未接种肿瘤的BALB/c-nu裸鼠和荷瘤鼠尾静脉注射药物后2h和4h,测量其在体内各组织器官(包括血液、大脑、心脏、肺、肝脏、肾、脾、胃、肠、骨骼、肌肉、卵巢)及肿瘤中的%ID/g。观察99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc F在鼠肿瘤模型的SPECT显像情况,然后进行对比。结果:(1)99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv的标记率为78.79%±5.70%(n=5),放化纯为92.17±3.32%(n=5)。(2)Western Blot结果显示VCAM-1在HT-1080细胞和SK-OV-3细胞中表达较高,而在786-O细胞中表达较低。免疫组化结果显示VCAM-1在HT-1080细胞中表达最高、SK-OV-3细胞中表达中等,而在786-O细胞中表达较低。(3)三种细胞对99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv摄取在2h内增加较快(相邻两个时间点比较,P<0.05),超过2h摄取率增加缓慢(相邻两个时间点比较,P>0.05);786-O、SK-OV-3和HT-1080三种细胞两小时细胞摄取率分别为3.54%、5.04%及8.5%。细胞流出实验显示在孵育后2h内有较多的99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv从786-O、SK-OV-3及HT-1080细胞中流出,孵育2h后99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv在786-O、SK-OV-3及HT-1080细胞中保持在一个稳定的水平。(4)99m Tc-VCAM-1-sc Fv在裸鼠体内血液清除率较快,肝脏及肾脏摄取率高提示9m Tc-VCAM-1-sc Fv主要通过肝脏及肾脏代谢。(5)SPECT显像:99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv注射后2h,HT-1080荷瘤鼠可以看到肿瘤组织较明显显影(T/B比值为1.66±0.14),注射后4h,HT-1080荷瘤鼠可以看到肿瘤组织显影进一步清晰(T/B比值为1.77±0.25);注射后2h,SK-OV-3荷瘤鼠可以看到肿瘤组织的大致显影(T/B比值为1.31±0.17),4h时,SK-OV-3荷瘤鼠可以看到肿瘤组织显影较2h明显(T/B比值为1.35±0.2);而786-O荷瘤鼠在注射后2h未能看见肿瘤组织的显像(T/B比值为1.01±0.19),4h仍未见肿瘤组织显影(T/B比值为1.15±0.20)。结论:99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv制备过程条件简单,反应温和,产率稳定。标记产物标记率和放化纯较高。细胞实验、生物分布及SPECT显像都显示有潜力成为一种新型肿瘤显像剂。99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv在小鼠炎症模型SPECT显像中的初步探讨目的:建立小鼠炎症模型,探讨99m Tc-VCAM-1单链抗体用于炎症SPECT显像的可行性。方法:(1)制备小鼠炎症模型:从小鼠右后肢肌肉注射0.1m L松节油。(2)99m Tc-VCAM-1-sc Fv在正常鼠和炎症模型鼠的SPECT显像:小鼠尾静脉注射99m Tc-VCAM-1-sc Fv,对炎症模型鼠和正常C57小鼠行SPECT显像,观察其显像剂分布。(3)99m Tc-VCAM-1-sc Fv在正常鼠和炎症模型鼠的生物分布:在炎症模型鼠和健康裸鼠注入显像剂后,分别于0.5h、1h、2h和4h测量其在体内各组织器官(包括血液、大脑、心脏、肺、肝脏、肾、脾、胃、大肠、小肠、左后肢肌肉、右后肢肌肉、骨骼)中的%ID/g。结果:(1)C57小鼠炎症模型容易建立,且所需时间短。(2)生物分布实验:C57血液清除率较慢,0.5h时为6.67±2.25%(n=4),2h时为5.56±1.12%(n=4),直到4h才降为3.96±1.46%(n=4)。肝脏、脾脏和肾脏摄取较高,其摄取率分别为11.48±1.4、23.04±3.86和32.13±16.8,99m Tc-HYNIC-VCAM-1-sc Fv可能大部分通过肝脏和肾脏代谢。炎症模型小鼠右下肢和左下肢2h肌肉摄取率分别为1.32±0.63%和0.35±0.07%,P<0.05;而右下肢和左下肢4h只有肌肉摄取率分别为0.84±0.15%和0.19±0.08%,P<0.05。(3)SPECT显像可以清楚看到小鼠右下肢显像剂浓聚较左下肢明显,右下肢炎症部位的显像剂的浓聚在4h时达到最高,造模侧1h、2h、4h和6h T/B的比值依次为1.44±0.20、1.57±0.16、1.77±0.23及1.46±0.06。造模小鼠右下肢显像剂分布在一周时间内逐渐增加,至两周时只有轻微显影。结论:应用新合成的分子探针99m Tc-labeled VCAM-1-sc Fv可以用于小鼠炎症模型显像。