【摘 要】
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猪繁殖与呼吸综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是危害世界养猪业的重要传染病,目前我国主要用疫苗接种预防,但预防效果不理想。据报道,猪CD151
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猪繁殖与呼吸综合症(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是危害世界养猪业的重要传染病,目前我国主要用疫苗接种预防,但预防效果不理想。据报道,猪CD151能与PRRSV3’非翻译区(UTR)结合,CD151抗血清处理MARC-145细胞可完全阻断PRRSV感染,但用此抗血清处理猪巨噬细胞能否阻断PRRSV感染尚不清楚。为了回答这一问题,本实验根据发表的序列设计引物,用RT-PCR从猪肺巨噬细胞细胞中扩增CD151胞外区编码序列,序列测定结果显示,扩增产物与发表序列的核苷酸同源性为99.7%,氨基酸序列同源性为99.2%。将猪CD151胞外区编码序列与羊细胞毒性T细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)胞外区(IgV)编码序列融合,构建融合表达载体pET-IgV-CD151。经IPTG诱导后,重组大肠杆菌表达预期的30kDa融合蛋白。用包涵体分离法获得纯化的重组蛋白。以50μg蛋白/只的剂量3次免疫小鼠后,间接ELISA抗体效价可达1:150000。以制备的免疫血清进行Western bloting试验,结果在CD151+PAM中能检测到预期的29kDa蛋白条带,在CD151PK-15细胞中未能检测到同样的蛋白条带。先用不同稀释倍数的免疫血清处理MARC-145,然后用PRRSV感染,感染后定期观察细胞病变和进行组织细胞半数感染剂量(TCID50)测定,结果在接种后的72小时内,免疫血清处理能阻断PRRSV对MARC-145细胞的感染,阻断作用具有血清剂量依赖性和毒株差异性,完全阻断2株PRRSV感染的免疫血清稀释倍数分别1:20和1:40;再用不同稀释倍数的免疫血清与PRRSV孵育,然后接种PAM或MARC-145细胞,定期进行细胞病变观察和TCID50测定,结果在接种后的72小时内,免疫血清处理也能阻断PRRSV对MARC-145细胞的感染,完全阻断2株PRRSV感染的免疫血清稀释倍数分别1:40和1:80;对于PAM细胞而言,免疫血清处理能降低两株PRRSV的滴度,但与非免疫血清相比差异不显著。这些研究结果进一步证明CD151在PRRSV感染MARC-145细胞中发挥重要作用,但在PRRSV感染PAM细胞中的作用不大。
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