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大型水生植物是一个广泛分布在各种水体中的高等植物类群,其中一些具有很强的耐污及去污能力,如香蒲,芦苇等,从而被用于开发构建污水处理和水体修复生态工程(如人工湿地)。同时,随着植物转基因技术的发展,特别是农杆菌感染单子叶植物技术的突破,转基因植物在环境污染控制技术领域的研究越来越受到关注。将具有环境污染控制及修复意义的目的基因引入水生单子叶植物体内表达,构筑能超量累积或去除环境中污染物质的转基因水生植物成为近年来植物修复技术领域的一个研究趋势。
本论文主要进行了两个方面的工作:第一方面,在建立了挺水植物香蒲愈伤组织培养体系的基础上初探了农杆菌转染香蒲愈伤组织的转化体系。本试验将香蒲种子消毒处理后萌发的无菌苗作为愈伤组织诱导材料,探讨了植物生长激素毒莠定不同浓度及分裂素6-BA不同浓度下愈伤组织生长和分化的情况,结果表明,5mg/L毒莠定诱导的愈伤组织在5mg/L6-BA上诱导的分化芽数量最多,一个愈伤组织最多分化出3个分化芽;同时,香蒲愈伤组织受到转化重组子农杆菌pB1121/LBA4404感染后,通过GUS瞬时表达检测了转化体系的可行性。阴性对照表明香蒲愈伤组织没有本底干扰,呈现GUS蓝色斑点的愈伤组织占总转化愈伤组织的40%,表明香蒲愈伤组织对农杆菌株LBA4404是敏感的,从而也确定了本试验香蒲愈伤组织材料的转化体系参数:香蒲愈伤组织育龄30天,农杆菌细胞悬浮液中加入100μmol/L AS,接种时间为10min,共培养3天后转入次共培养基培养7天,timentin杀灭愈伤组织剩余农杆菌的浓度为400 mg/L。另一方面,讨论了聚磷激酶基因(ppk)在重组进入大肠杆菌BL21后的表达情况。结果表明,在适宜环境条件下,BL-PPK在高的外源磷浓度或者较低磷浓度(抑制细胞生长)条件下,均能彻底去除磷,去除率达99%以上。因此,证明了聚磷激酶基因在原核系统中可以充分发挥吸磷功能,不仅为构建可应用于废水生物除磷的工程菌提供了一种思路,同时为聚磷激酶转化水生植物进行植物修复打下基础。