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应用PCR技术从芝田硫化叶菌(SulfolobusShibatea)B12中扩增出麦芽寡糖基海藻糖合酶(maltooligosyltrhalosesynthase,MTSase)基因,通过T4DNA连接酶将其连接于T-easy-vector上,通过电转化法将重组质粒转化到大肠杆菌受体菌DH5α中,蓝白斑筛选阳性菌落,通过菌落PCR、质粒PCR扩增及质粒酶切鉴定、测序,用NdeⅠ和BamHⅠ同时双酶切重组质粒和原核表达载体PET-2la,通过T4DNA连接酶将目的基因片段克隆入表达载体中,酶切鉴定,利用热击法将重组质粒PET-2la-MTSase转化入BL21(DE3)大肠杆菌中,经过IPTG诱导表达MTSase基因蛋白,SDS-PAGE电泳检测其表达蛋白的分子量为74KD,表达量占菌体总蛋白的16.8%,酶活为38.53U/克湿菌体。并进行MTSase基因工程菌的酶活测定方法及发酵条件的优化。
研究结果表明,通过对其基因序列的测定,得到了这个酶基因的全序列,MTSase的基因由2,187bp组成,编码728个氨基酸;其结果与同属的产酶菌株硫矿硫化叶菌KMl的核苷酸序列比较,同源性为96%。