二维有序图案化蛋白阵列的制备及其SERRS光谱检测

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本文利用高度有序的聚苯乙烯(PS)纳米粒子做为模板,制备有序的蛋白阵列,进行特异性免疫识别反应。并借助于表面增强共振拉曼(SERRS)光谱及表面增强荧光(SEF),对标记蛋白能够实现低浓度检测。主要创新成果如下:1.通过PS模板结合表面等离子体刻蚀(RIE),发展了一种简便、耐用的技术制备单一蛋白构成的有序阵列。这种蛋白阵列为圆形,尺寸可通过实验条件的改变加以调节。经过免疫识别后,借助于SERRS光谱,可对不同浓度标记蛋白进行检测,得到了浓度同强度的依赖关系曲线,能够对蛋白进行简单的定量分析。2.在单一蛋白阵列的基础上,制备了双蛋白分别生长在交替区域内的有序阵列。通过实验条件的改变,可以实现对于两种蛋白所覆盖区域面积的调节。由于SERRS光谱具有高灵敏度,经特异性的免疫反应后,分别得到了两种标记抗体的浓度同强度的依赖关系曲线,检测灵敏度均可以达到1ng/mL。3.利用高度有序的PS模板,制备出图案化Ag阵列。通过Ag和蛋白分子的共价键作用,将待测蛋白有选择的生长在图案化的Ag膜表面能够实现对标记蛋白的SEF检测。得到了不同浓度下,由待测蛋白所构成的有序阵列的共聚焦荧光显微镜图,以及荧光强度同蛋白浓度对数的依赖曲线,对于标记蛋白的检测灵敏度可以达到10pg/mL。4.利用TiO2纳米粒子的拉曼活性和生物相容性,在TiO2表面吸附细胞色素c(Cyt c)分子,观测到了拉曼光谱的增强现象。同以往研究不同的是,我们避免了使用溶胶,电极等增强基底,可以直接观测和分析TiO2纳米粒子同蛋白质的相互作用。随后调节Cyt c的浓度,增强拉曼光谱显示出来很强的浓度依赖性。同时,吸附在TiO2纳米粒子表面的Cyt c的检测限可以达到5×10-6M。
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