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植物在生长过程中会受到干旱、高盐等胁迫,影响植物正常的生长发育,它可以表现在生长发育的各个阶段,如种子萌发、营养生长和生殖生长,直到开花结实,降低作物的产量与质量。当植物受到外界的环境胁迫时,各种胁迫因素被转化成植物内部的信号,通过多种途径,在不同水平上调控抗逆相关基因的表达。转录水平调控作为基因表达调控的重要方式,转录因子的研究显得尤为重要。NAC膜结合转录因子是植物特有的转录因子,在植物生长发育和胁迫响应中发挥调控作用。目前,有关玉米NAC膜结合转录因子的研究未见报道。 本研究通过生物信息学分析,在玉米中发现了5个NAC膜结合转录因子(Zm2g163914、Zma2g125777、Zm2g064541、Zm2g003715、Zm035434),从玉米B73自交系cDNA中克隆得到Zm043548,命名为ZmNTL1,并对其进行了初步的功能分析。结果如下: 1.克隆得到 ZmNTL1全长。利用生物信息学软件分析 ZmNTL1序列,结果表明,ZmNTL1全长1554 bp,共编码517个氨基酸残基,蛋白质N端9-159氨基酸处含有保守的NAC结构域,C端含有跨膜结构域。 2.组织特异性表达分析表明,ZmNTL1在叶中表达量最高,根中次之,茎中最低。 3.成功构建了植物表达载体 p35::ZmNTL1,并通过农杆菌 GV3101介导的方法转化到模式植物拟南芥中,获得了过表达ZmNTL1的单拷贝纯系拟南芥。 4.对 ZmNTL1拟南芥过表达株系与野生型进行盐处理。用50mM、100mM、150mM、200mM NaCl处理过表达株系与野生型拟南芥,随着盐浓度升高,过表达株系种子萌发率高于野生型,根长也较长。土培转基因拟南芥的盐处理结果显示,过表达株系盐处理后的存活率高于野生型。 5.对 ZmNTL1过表达株系拟南芥与野生型进行渗透胁迫处理。用200mM、250mM、400mM甘露醇处理拟南芥。过表达株系拟南芥在处理后萌发率略高于野生型,根长则无明显变化。在土培条件下进行干旱处理并进行复水实验,过表达株系的成活率率略高于野生型拟南芥。 6. RT-PCR分析抗逆相关基因表达,结果显示,ZAT基因表达量升高。