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目的:子宫内膜癌是目前女性生殖系统中常见的恶性肿瘤之一,严重危及着女性的生命安全。PI3K信号通路在80%的子宫内膜癌中处于高度激活状态。PTEN抑癌基因的突变不仅会导致PI3K信号通路的激活也会对基因组的稳定性造成一定的影响,目前临床上缺少有效的子宫内膜癌靶向治疗方案。因此本文致力于为临床治疗PTEN缺失型的子宫内膜癌提供有效的靶向治疗方案及其分子机制的探讨。方法:(一)体外实验:选择带有PTEN缺失的四种子宫内膜癌细胞系ishikawa,AN3CA,Nou-1,和Hec108细胞系以及一株PTEN野生型的细胞系Hec1A,PARP抑制剂Olaparib和PI3K抑制剂BKM120单独和联合处理这五种子宫内膜癌细胞系,应用克隆形成(Clonogenic proliferation assay)的实验方法观察药物对细胞的生长抑制效率;利用模拟体内生长环境的3D培养实验(3-Dimensional sphere culture)观察药物对细胞成球情况的影响;利用彗星实验(comet assay),免疫荧光(immunofluorescence)观察Olaparib和BKM120单药以及联合作用后对四种PTEN缺失型子宫内膜癌细胞系的DNA损伤以及参与损伤修复过程中关键蛋白与因子在核内定位的影响;利用染色体分散实验(chromosome spread)观察药物单独以及联合应用后对细胞染色体完整度与基因组稳定性的影响;免疫印迹法(western blot)检测单药以及联合用药后对细胞凋亡标志蛋白的影响;免疫印迹法(western blot)观察药物处理后对PI3K/mTOR/AKT细胞增殖信号通路相关蛋白表达的影响;利用real time RT-PCR以及免疫组织化学技术观察Olaparib和BKM120单药以及联合作用后对BRCA1基因信使RNA以及蛋白表达的影响。(二)体外实验:动物模型的建立:原位注射表达Cre酶的腺病毒Ade-Cre于6-8周大小的雌鼠子宫腔中,进行子宫内膜上皮细胞抑癌基因Pten和Lkb1的敲除,注射后6周左右的时间利用小动物核磁成像技术(MRI)观察肿瘤的大小以及位置。将小鼠随机分为四组,每组三只,分别为对照组(Vehicle),单药Olaparib组,单药BKM120组以及联合Olaparib与BKM120组。联合Olaparib和BKM120组每周六次给药,Olaparib腹腔注射,50mg/kg,BKM12O灌胃给药,30mg/kg;Olaparib单药组腹腔注射,50mg/kg以及等量生理盐水;BKM120组灌胃给药,30mg/kg以及等量生理盐水;对照组注射等量生理盐水。用药三周后再次利用小动物核磁成像技术(MRI)观察肿瘤的大小与位置。接下来将小鼠处死,剥离肿瘤组织,4%的多聚甲醛固定后进行蜡块包埋,石蜡切片后,进行H&E染色病理学检查以及免疫组化研究药物对癌组织中细胞生长、存活,相关细胞信号转导通路以及DNA损伤/修复关键蛋白的核定位与表达的影响。结果:(1)联合抑制PI3K和PARP可以有效的抑制PTEN缺失型子宫内膜癌细胞系的增殖。(2)联合用药更加有效的抑制了PtenLkb1双缺失的子宫内膜癌基因工程小鼠肿瘤的生长。结论:(1)PARP抑制剂Olaparib单药对PTEN缺失的子宫内膜癌细胞系并没有很好的治疗效果。(2)BKM120单药引起一定的DNA的损伤以及对同源重组修复功能产生一定的影响,同时对PI3K信号通路的活性产生一定抑制效应,这些均使PTEN缺失的子宫内内膜癌对PARP抑制剂Olaprib更加的敏感。(3)PTEN蛋白的水平决定着Olaparib和BKM120联合用药的有效性。(4)联合抑制PI3K与PARP可以有效的治疗PTEN缺失的子宫内膜癌,这为临床治疗PTEN缺失的子宫内膜癌患者提供了有效的靶向治疗方案建议。