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喉癌是上呼吸道常见的恶性肿瘤,为人体第6位高发肿瘤。我国东北地区高发,且发病率呈逐年上升趋势。与其他人类肿瘤相同,喉癌的发生和进展是一个包括多种遗传变化的多步骤过程,往往伴有染色体的异常,这种非随机的异常包括有染色体的丢失、获得、缺失、重排和异常的复制、扩增等。基因组的不稳定导致的癌基因激活、抑癌基因丢失或失活是肿瘤发生的机制之一。因此应用先进的分子细胞遗传学技术寻找其染色体方面的异常以进一步发现相关的癌基因和抑癌基因,并研究这些基因在肿瘤形成过程中的变化,对了解其起源发生发展及其生物学行为有重要意义。比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)技术是Kallionimi等于1992年在消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)的基础上建立起的一种分子细胞遗传学技术,其以实验方法简单,应用范围广,一次可获得全基因组DNA水平改变的详尽资料,而备受人们关注。由于喉癌研究中遗传学资料有限,因此为了探讨喉癌的染色体改变,本研究应用比较基因组杂交技术分析了18例喉癌患者,发现大量的染色体失衡区域,为阐明喉癌的病因发病机理提供一定的实验依据。 实验材料 1.肿瘤标本 2.DNA提取相关试剂 3.比较基因组杂交相关试剂 实验方法 分别提取肿瘤标本和正常人外周血的基因组DNA,然后用缺口平移标记上不同颜色(红或绿)的荧光素,同时与制备好的正常人外周血淋巴细胞中期染色体标本进行原位杂交,杂交后可依据不同的荧光染料标记进行检测。应用装有冷CCD照相机的荧光显微镜摄取每例喉癌标本的荧光染色体图像,经QcGH(Leica公司)软件分析得到每例喉癌的分析图。.每例标本分析至少5个高质量的核型,并将结果综合得出该标本整套染色体拷贝数扩增或丢失的全貌。结果 根据所摄取的荧光染色体图像和软件分析所获得的分析图,用CGH方法对18例喉癌标本进行了分子细胞遗传学分析,结果显示每例喉癌细胞染色体均有不同程度的变化,包括染色体全部或部分的扩增或丢失。平均每例有12.9处异常区域,丢失多于扩增,分别为每例7.2处和5.7处。其中扩增最多的是3q,占78%,此外扩增超过30%的染色体有sp(61%)、llq(56%)、lq(50%)、18p(44%)、sq(39%)和15q(39%)。而丢失最多的是sq,占78%,此外丢失超过30%的染色体有3p(70%)、gp(67%)、13q(50%)、lp(44%)和14q(39%)。有多条染色体区带上出现特异的获得或丢失,特别是lp13一21(8/18)、3pZI一23(14/18)、5p21一22(14/18)、9p12一pter(10/18)和13q21一31(8/18)的拷贝数增加明显,而lqll一21(11/18)、3q15一21(12/18)、8p22一24(6/18)、llqlZ一13(8/18)、15qZI一23(7/18)和18pll(8/18)区域的丢失较多。结论 本研究应用CGH等方法对18例喉癌标本进行分析发现染色体存在着非随机的DNA拷贝数扩增或丢失的位点,提示这些位点可能含有候选的原癌基因和抑癌基因。比较基因组杂交技术用于分析染色体DNA水平的改变,能获得良好结果并具有可重复性,从而提供了一条肿瘤细胞遗传学研究的可行路径。