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目的：建立荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative Polymerase ChainReaction FQ-PCR)溶解曲线分析技术，初步对正常人外周血及大肠癌患者外周血、癌周组织中T细胞抗原受体(T Cell Receptor，TCR)β链各家族互补决定区3(Complementarity Determining Region3，CDR3)谱系进行荧光PCR定量分析，并采用溶解曲线法分析TCRβ链各家族的单克隆、寡克隆、多克隆增生(CDR3谱系漂移)情况。下一步拟对单克隆或寡克隆增生的T淋巴细胞β链的CDR3区进行测序，分析大肠癌患者机体抗肿瘤T细胞的TCR分子特征，为大肠癌患者T细胞应答机制、个性化治疗提供理论基础。
方法：1、标本采集：(1)采集4例正常人外周抗凝静脉血5ml；(2)采集9例大肠癌患者术前外周静脉血5ml及其中7例手术患者癌周围组织(30 μg以上)；2、按密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC)，提取PBMC及组织样品中总RNA，逆转录成cDNA：3、以各研究对象的cDNA为样本，以人TRBV26个家族基因设计上游引物，TRBC基因设计共同的下游引物，荧光定量PCR扩增TCRβ链各家族的CDR3区，进行相对定量分析，同时对各PCR产物做溶解曲线图，分析各家族CDR3谱型。
结论：(1)正常人PBMC中26个TRBV CDR3的荧光定量PCR溶解曲线谱型图呈多峰图，无单峰、寡峰、偏峰及极低水平或缺失等现象出现，提示机体在没有肿瘤、感染、自身免疫疾病的情况下，TCR B链CDR3谱型图呈高斯分布；(2)在大肠癌患者PBMC及其组织样本中肿瘤浸润性T淋巴细胞(Tumour Infiltrating Lymphocyte，TIL)的TRBV CDR3荧光定量PCR溶解曲线谱型图中，显示TCRβ链各家族出现数目不等的单峰、寡峰、偏峰及极低水平或缺失等现象，提示其可能是在肿瘤相关抗原等决定簇的驱使下而发生T细胞克隆性扩增(单克隆、寡克隆)，或是在肿瘤存在的情况下，出现了T细胞增生抑制；(3)有限的正常人和临床样本分析结果提示，荧光定量PCR溶解曲线法初步适用于分析TCR CDR3谱型漂移。下一步拟对这些单/寡克隆增生的T淋巴细胞的TCR分子特征(基因序列、氨基酸序列及结构)进行进一步分析，为大肠癌患者T细胞应答机制、个性化治疗研究提供基础。