黄瓜自噬相关基因CsATG8a和CsATG8f的功能验证

来源 :哈尔滨师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:monkey825
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自噬是真核生体内普遍存在的一种防御机制,当植物受到外界环境胁迫时,植物体内产生过多的活性氧,活性氧在植物体内不断积累,对植物细胞造成毒害,这时植物体内自噬被诱导,将受损的细胞器或蛋白等物质运输到液泡或溶酶体中进行降解,降解后的分子可以被重新利用,为植物的生长发育提供条件,对植物适应多变的环境有重要意义。黄瓜自噬相关基因ATG8有多个同源基因,Cs ATG8a和Cs ATG8f是其中两个,为探究这两个基因在黄瓜中的功能,本研究克隆了Cs ATG8a和Cs ATG8f基因,并进行了生物信息学分析,将克隆产物成功构建超表达载体和突变载体,并将载体转入农杆菌中,通过农杆菌侵染得到转基因黄瓜和拟南芥,对转基因植株进行盐、干旱及碳饥饿胁迫,进行生理指标检测,并分析Cs ATG8a和Cs ATG8f基因的功能。研究结果如下:1.利用PCR技术成功克隆Cs ATG8a和Cs ATG8f基因,利用生物信息学分析,Cs ATG8a基因编码118个氨基酸,蛋白理化性质分析为亲水蛋白,亲缘关系上与烟草和拟南芥ATG8a最近;Cs ATG8f基因编码118个氨基酸,蛋白理化性质分析为亲水蛋白,但不属于分泌蛋白,所以不是跨膜蛋白,进化树分析与拟南芥和胡萝卜ATG8f关系最近。2.构建CsATG8a和CsATG8f超表达载体,并利用基因编辑构建突变载体,通过农杆菌侵染将质粒转入到拟南芥和黄瓜中,得到超表达和突变体拟南芥及超表达黄瓜植株。3.对筛选出的转基因拟南芥和黄瓜进行表型鉴定和生理指标分析测定,结果如下:(1)碳饥饿胁迫下,超表达Cs ATG8a和Cs ATG8f拟南芥对饥饿胁迫不敏感,具有一定的抵抗能力,根长分析超表达Cs ATG8a和Cs ATG8f最长,其次为WT,最后是突变体Cs ATG8a和Cs ATG8f拟南芥;(2)盐胁迫处理,超表达Cs ATG8a和Cs ATG8f拟南芥根长、鲜重高于WT、突变体植株,而相对电导率较低,Cs ATG8a和Cs ATG8f基因具有抵抗盐胁迫的能力;(3)干旱胁迫和盐胁迫黄瓜植株,超表达Cs ATG8a和Cs ATG8f黄瓜的抗氧化酶活性高于WT,有显著差异,Cs ATG8a和Cs ATG8f基因响应干旱胁迫和盐胁迫。综上所述,黄瓜自噬相关基因Cs ATG8a和Cs ATG8f能够增强自噬的发生,赋予植株一定的抵抗能力,减少胁迫对植物的伤害。
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