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原发性肝癌是一种恶性度高、进展快、预后差的恶性肿瘤。目前能达到长期治愈的唯一希望仍是手术切除或肝移植，然而术后远期效果较差，复发转移率高，据文献报道复发转移率高达50％以上。这可能是因为术前外周血中已有肝癌细胞，或常规检查方法不能发现的微小转移灶，或是不完整的手术切除，或是术中、术后肿瘤细胞的播散。在分子水平上对肝癌的复发转移做出早期诊断，将可能在为患者选择的合适治疗方案，和监测其治疗效果提供很大的帮助，因此如何术前预测或术后预防肝癌的复发转移是当前的研究热点。 AFP基因位于第4对染色体，由14个外显子组成，长17kb(千碱基对)。在胚胎发育期，胎儿肝细胞和卵黄囊基因开放，表达AFP并分泌入血。出生后AFP表达迅速减少，而白蛋白合成增多。最近，在肝细胞肝癌的肿瘤组织AFP mRNA已经被发现而非肿瘤组织者没有，这被报道为当肝细胞癌变后，由于甲基化作用使AFP基因重新开放表达AFP。所以，至今血清AFP检测已广泛应用于肝癌的临床诊断，然而，血清AFP检测对预测肝癌是否转移意义不大，目前很多学者致力于检测外周血AFP mRNA来间接推测血循环中存在播散的肝肿瘤细胞的研究。 本研究采用核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法(fluorescence quantitative(FQ)PCR combined with nest PCR)对肝癌特异性基因AFP mRNA进行定量检测。 吴存造 2003年浙江大学硕士学位论文 WuCunZao dssertation for M．M．第一部分：检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞 AFP mRNA表达的怠义1．目 的 研究定量检测原发性肝癌患者外周血单个核细胞①BMC）甲胎蛋白AFPmRNA表达的意义。2．材料与方法2．l研究对象 收集2001～2002年我院收治的原发性肝癌等疾病95例。其中肝细胞肝癌引例，男性 43例，女性 8例，年龄 27～70岁，中位年龄 41岁。经 B超、CT。等影像学和血清AFP恨IA法）检查诊断，经手术切除病理证实39例；转移性肝癌10例，其他肿瘤18例（胃癌6例、胰腺癌3例、直肠癌3例、乳腺癌3例、肺癌3例人 慢性肝病患者16例（肝硬化12例，慢性肝炎4例）。2．2方法 核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法3．3 统计学处理 采用／检验，所用数据均在 spss刀上处理，u二 0刀5。3．结果 AFP mANA在非肝癌的恶性肿瘤患者无异常表达，在转移性肝癌（20％、2／10）、慢性肝病（6．3％ 1／16）、原发性肝癌（37．3％、19／sl）；AFP mRNA的基因拷贝数和肝癌TN M分期【‘］＊ 静脉癌栓、肝外转移显著相关，而与肿瘤大小及血清AFP值无相关。4．结论 巢式FQFCR检测肝癌患者外周血AFP－m叫A异常预示有血源性转移的可能，可作为肝癌的诊断、肿瘤分期和有无肝外转移及愈后的指标。 第二部分：荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血 AFP mRNA1．目的：探讨肝癌、癌旁组织及外周血 AFP mANA的表达意义。2．材料与方法：2．1．二研究对象 收集 2001年门 月～2002年 2月年我院收治手术的原发性肝癌 30例，其中男性26例，女性4例，年龄28～70岁，平均43岁。血清AFP（RIA法）Z20ng — —2一 吴存造 2003年浙江大学硕士学位论文 WuCunZao dissertation for M·M·／ml的 ZI例，AFP＜20ng ／ml的 8例。术前定量检测外周血 AFP mRNA，全部经手术切除，病理诊断及免疫组化，术后并随访。2．1．2材料 术前取静脉血sml送检（按说明书操作详见下）；术中切除少量新鲜肝癌组织、癌旁边约＊，（各约0．sg人 迅速置液氮中冻存。2．2方法核酸扩增技术结合荧光标记探针杂交方法2．3 统计 采用几何均数配对t检验。3．结果： 门）AFP mRNA在肝癌组织与癌旁组织的表达，两者表达量差异有显著性， P＜0刀5。 （2）肝癌组织AFP mRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 （或）转移及血清AFP明显相关；而与外周血的AFP mRNA的表达相关 无显著性。4．结论： 定量检测 AFP mKNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微小肝癌、肝癌的复发和转移，并指导治疗，判断预后。