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本研究通过对抗黄矮病的小麦-中间偃麦草二体异代换系与普通小麦杂交的杂种经幼胚愈伤组织培养诱导产生再生植株后代进行抗性选择和分子细胞学鉴定,获得抗黄矮病的易位系,并筛选出与抗性连锁的分子标记,为该抗源在小麦育种计划中的利用提供材料,并为分子标记辅助选择打下基础 1.以生物素标记的中间偃麦草基因组DNA为探针,对抗黄矮病的小麦-中间偃麦草二体异代换系与普通小麦杂交的杂种经幼胚愈伤组织培养诱导产生的再生植株后代进行原位杂交(GISH)鉴定,筛选出两个姐妹纯合易位株系04Y5579-2和04Y5579-3,两个材料均含有一对中间偃麦草染色体臂;以黑麦基因组DNA为探针的原位杂交表明:株系04Y5579-2染色体组成中含有黑麦的1RS染色体。 2.以小麦第二同源群上的SSR引物,对易位株系04Y5579-2和04Y5579-3以及其亲本进行扩增,结果表明:2A,2B染色体上和2D长臂上的引物在易位系中扩增出与小麦亲本相同的片段,2DS上的引物在易位株系04Y5579-2和04Y5579-3中均不能扩增出与小麦亲本相同的目的片段,说明两个易位株系缺失了小麦染色体的2D短臂。 3.以小麦第二同源群上的RFLP探针的DNA序列和网上公布的小麦第二同源群上的EST序列为模板,共转化设计30对PCR引物对易位株系、小麦亲本和含有2Ai-2染色体的抗黄矮病材料包括中间偃麦草、二体附加系Z6,二体代换系N439、N420、N431、N452进行扩增。共筛选出5对引物可以在小麦亲本和易位株系间扩增出差异片段。其中,基于小麦第二同源群染色体短臂上的RFLP探针的DNA序列和EST序列设计的引物PSR126、PSR131、ESTBQ171983可以在含有中间偃麦草2Ai-2染色体的抗病材料包括两个易位株系中比普通小麦亲本多扩增出一条中间偃麦草2Ai-2染色体的特异片段,而基于第二同源群染色体长臂上的RFLP探针的DNA序列和EST序列设计的的引物PSR112F和ESTBE445884,只可以在中间偃麦草,二体附加系Z6,二体代换系N439、N420、N431、N452等含有整条2Ai-2染色体的材料中比普通小麦亲本和易位株系多扩增出一条特异片段,表明:易位株系04Y5579-2和04Y5579-3的外源染色体来自中间偃麦草2Ai-2染色体的短臂。综合GISH、SSR和STS标记