祖师麻为瑞香科植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche.、陕甘瑞香D. tangutica Maxim.或凹叶瑞香D. retusa Hemsl.的干燥茎皮和根皮,能够祛风湿、活血止痛,有小毒,用于治疗风湿痹痛、关节炎、类风湿性关节痛,为西部地区民间用药。甘草具有缓急止痛、调和诸药及解毒的功效,中医有“十方九草”之说。现代科学研究表明,甘草可以调节机体免疫功能,甘草皂苷类成分甘草酸具有类糖皮质激素样作用,甘草黄酮也具有较强的抗炎作用。民间用药经验表明,甘草配伍祖师麻具有良好的增效减毒作用。本课题组前期研究发现,甘草提取物能够显著提高瑞香素的生物利用度,但其具体机制尚不清楚。类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种病因不明的慢性炎性自身免疫性疾病,表现为释放自身抗体,产生滑膜炎症,形成血管翳并破坏软骨使得周围关节呈非特异性的对称性炎症,发病机理目前不甚清楚。采用大鼠佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis, AA)模型,以RA发病机制中重要炎症细胞因子如肿瘤坏死因子-α(TNF-a)、白细胞介素-1β(IL-1p)、血管内皮生长因子(VEGF)以及巨噬细胞游走抑制因子(MIF)为指标,结合足肿胀度、关节炎指数(AI)和膝关节组织病理变化的检查,对祖师麻-甘草配伍比例进行筛选,并初步探讨其可能的作用机制,以期开发成抗RA新药。实验结果显示,祖师麻组、甘草组及祖师麻-甘草配伍组可明显抑制AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β水平异常升高,并且降低滑膜组织中VEGF、MIF的表达,祖师麻-甘草配伍组药效优于祖师麻组和甘草组。由此推测祖师麻与甘草,在治疗RA时所表现的抗炎作用,可能是通过调节TNF-α、 IL-1β、VEGF及MIF等细胞因子的产生而抑制炎性细胞浸润、滑膜组织增生和血管翳的形成,减轻软骨和骨破坏,从而发挥疗效。因此,将祖师麻与甘草配伍使用治疗RA,可以发挥协同增效作用,且祖师麻-甘草(3：2)是其最佳配伍比例,调节血清炎症细胞因子TNF-α、IL-1β及滑膜组织VEGF、MIF的表达可能是祖师麻-甘草配伍治疗类风湿性关节炎机制之一。采用大鼠体内药代动力学模型初步考察了甘草提取物对祖师麻中瑞香素药代动力学特征参数的影响,以及甘草中主要活性成分甘草酸、甘草苷对瑞香素药代动力学参数的影响,初步探索其配伍用药的合理性。将大鼠分别灌胃祖师麻提取物、祖师麻-甘草提取物、瑞香素、瑞香素与甘草酸混合物及瑞香素与甘草苷混合物后,不同时间点采集血样,UPLC-MS-MS分析测定血浆中瑞香素浓度,建立药物浓度-时间曲线,药动学参数采用DAS3.2.4软件计算分析。结果表明,甘草提取物能够显著增加祖师麻中瑞香素的AUC、Tmax,降低CL；甘草酸配伍瑞香素后,对瑞香素药动学参数无明显影响,甘草苷配伍瑞香素,能够增大瑞香素的AUC、Cmax、Tmax,降低瑞香素CL与MRT。因此得出结论,甘草提取物能够显著增加祖师麻中瑞香素的生物利用度,可能与其黄酮类主要活性成分甘草苷有关。对此本课题采用Caco-2细胞吸收模型及体外肝微粒体代谢模型研究甘草及其主要活性成分对祖师麻中瑞香素吸收与代谢环节的影响。采用Caco-2单层细胞模型研究甘草提取物对祖师麻中瑞香素吸收的影响。数据表明,甘草提取物对瑞香素在Caco-2单层细胞模型的转运没有显著影响,祖师麻组及祖师麻-甘草组中瑞香素的Papp值没有显著差异,提示甘草提取物对祖师麻中瑞香素在小肠上皮细胞吸收影响可能不显著。采用体外肝微粒体模型研究甘草及其主要活性成分对祖师麻中瑞香素代谢的影响。祖师麻提取物组与祖师麻-甘草提取物组经肝微粒体系统代谢后,使用HPLC分析测定瑞香素的剩余量,后者与前者相比明显提高,说明甘草能够通过影响肝脏中的代谢酶,从而明显抑制祖师麻中瑞香素的代谢,增加瑞香素在体内的血药浓度,从而使祖师麻-甘草提取物中瑞香素的生物利用度明显大于祖师麻提取物中瑞香素的生物利用度。不同浓度甘草中主要活性成分,如甘草酸及其代谢产物甘草次酸,甘草苷及其代谢产物甘草素对瑞香素在肝微粒体中代谢影响研究结果表明,瑞香素+甘草酸、瑞香素+甘草次酸、瑞香素+甘草苷、瑞香素+甘草素经肝微粒体Ⅰ相孵育系统代谢后,说明甘草提取物中的主要成分对瑞香素在肝微粒体Ⅰ相代谢没有显著影响作用,仅瑞香素+甘草次酸高剂量组与瑞香素+甘草素高剂量组中剩余的瑞香素药量与对照组,显著增多,有统计学差异；经肝微粒体Ⅱ相孵育系统代谢后,瑞香素+甘草酸组,瑞香素+甘草苷及瑞香素+甘草素组中瑞香素剩余药量与对照组相比明显增加,瑞香素+甘草次酸组中瑞香素剩余药量与对照组相比明显降低,说明甘草酸、甘草苷及甘草素对瑞香素在肝微粒体中的Ⅱ相代谢有一定抑制作用,而甘草酸代谢产物甘草次酸对瑞香素在肝微粒体中的Ⅱ相代谢有一定促进作用。本课题采用整体动物模型,从药效学角度阐明甘草协同祖师麻治疗类风湿性关节炎的配伍机制,并筛选其最佳配伍比例；同时采用大鼠体内药代动力学试验、Caco-2细胞模型及体外肝微粒体代谢模型等多种药代动力学模型,以转运蛋白和代谢酶为切入点,从吸收、代谢途径较为完整地阐述甘草协同祖师麻治疗类风湿性关节炎的协同增效机制,采用多角度、多生物模型,较为全面的揭示和探讨了甘草提取物及其主要活性成分对祖师麻中瑞香素吸收、代谢的影响,并初步阐明了其作用机理,综合说明了甘草配伍后瑞香素体内生物利用度提高的原因,为甘草协同祖师麻的合理性提供生物药剂学依据。本课题的研究为祖师麻-甘草复方的开发打下了基础,并探讨其可能作用的机制,以期开发成为新药。本课题也同时为中药活性物质基础的体内过程研究提供了新思路和新方法,特别是为复方体内过程研究提供了借鉴,通过对组方活性成分的吸收、代谢研究,来揭示组方的科学内涵。