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水稻纹枯病是水稻上的三大病害之一,严重的影响了水稻的产量和质量。引起水稻纹枯病害的病原菌包括多核的瓜亡革菌(Thanatephorus cucumeris)和双核的稻角担菌(Ceratobasidium oryzae-sativae),它们的无性世代分别称为茄丝核菌(Rhizoctonia solani K(u|¨)hn)和稻丝核菌(Rhizoctonia oryzae-sativae)。病菌难以产生担孢子、不产生无性孢子以及缺乏高效的遗传转化系统等因素导致水稻纹枯病菌的分子生物学特性研究相对滞后,甚至难以开展。本论文以瓜亡革菌菌株WH-1,稻角担菌菌株WH-87及含有稻角担菌和瓜亡革菌两种真菌rDNA的菌株RCOL-1为试验材料,进行了原生质体的制备、再生以及原生质体再生后代生物学特性分析,旨在探索水稻纹枯病菌原生质体制备和再生规律,为建立水稻纹枯病菌遗传转化体系提供转化材料。对影响水原生质体制备的酶、酶浓度、酶解时间、菌龄及培养条件等因素进行了研究,试验结果如下:供试菌株WH-1原生质体制备的最佳条件是裂解酶(LysingEnzymes,Sigma)浓度1.5%,菌龄是将菌丝于28℃条件下,120rpm,PDB中摇培15h,裂解酶反应时间是150min,纯净的原生质体稀释后涂布在RM上于28℃条件培养,再生率为65%。供试菌株WH-87和RCOL原生质体制备的最佳条件是:裂解酶浓度为2%,菌龄是将菌丝于28℃条件下,120rpm,PDB中摇培24h,酶解时间是150min,纯净的原生质体稀释后涂布在RM上于28℃条件培养,再生率为32.6%和2%。以菌株WH-1为出发菌株,获得了40株原生质体再生菌株。与出发菌株的菌落形态相比,这些再生菌株在菌落形态和核型上没有显著差异;有27个再生菌株的生长速度与出发菌株相比显著增快;原生质体再生菌株在致病力上也存在显著性差异。以菌株WH-87为出发菌株,获得了140个原生质体再生菌株。根据再生菌株的菌落形态差异,将这些再生菌株分为两种类型(类型Ⅰ和类型Ⅱ),类型Ⅰ与菌株WH-87类似。对50个再生菌株进行生长速度测定,结果表明:Ⅰ类菌株生长速度高于出发菌株,Ⅱ类菌株生长速度显著低于出发菌株,分别占全部原生质体再生菌株的88.6%和11.4%。它们的致病力存在显著性差异。细胞核型没有差异。以菌株RCOL为出发菌株,获得的82个原生质体再生菌株。根据再生菌株的菌落形态差异,将这些再生菌株分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ种类型,分别占全部原生质体再生菌株的61.1%、13%和15.9%,类型Ⅰ与菌株RCOL的菌落形态类似;Ⅰ类菌株的生长速度与出发菌株没有差异,Ⅱ和Ⅲ类菌株的生长速度显著低于出发菌株;它们的致病力存在显著性差异;细胞核数目统计结果表明再生菌株的核型没有显著差异。