论文部分内容阅读
蜂王浆中的主要王浆蛋白是王浆蛋白中的水溶性部分,占总蛋白含量的46%-89%,为主要成分。研究表明,MRJPs是由同源性很高的一系列蛋白组成的蛋白家族,这一家族共有九个成员。大量实验证明,蜂王浆具有重要的医疗保健作用和生物学功能,这可能与王浆中的MRJPs密切相关。本研究选取平湖浆蜂、美意、苏王1号3个王浆性能不同的意蜂种群为研究对象,首次利用高效液相色谱技术测定三个种群MRJP1的相对含量,分析不同种群间的差异规律,探讨MRJP1作为评价蜂王浆新鲜度的指标的可行性;首次利用荧光定量PCR技术检测MRJP1基因在不同种群间的表达规律;用PCR-SSCP方法检测MRJP1基因的多态性,揭示不同基因型在种群间的分布规律以及与MRJP1含量性状的关联,为今后选育出MRJP1高含量性状的蜜蜂良种奠定基础。主要研究结果如下:1.利用HPLC技术对3个种群MRJP1的相对含量进行测定,结果表明:平湖浆蜂蜂王浆中MRJP1的相对含量为0.25%,与苏王1号有显著差异(P<0.05),与美意有极显著差异(P<0.01),但苏王1号和美意之间无显著差异。三种群所在产地同属于长江三角洲地区,其气候、环境等地理概况基本一致,并且在同一时期、相同的蜜源(油菜)条件下采集的样本。王浆产量的高低可能影响到蜂王浆MRJP1含量的高低,而MRJP1的含量和不同的蜂种之间也有一定的联系,不能将MRJP1作为评价蜂王浆新鲜度的指标。2.选用同一时期、相同的蜜源(油菜)、同一地区、相同日龄(10日龄)的3个意蜂种群为研究对象,采用荧光定量PCR技术检测MRJP1基因在3个种群间的表达差异,结果表明苏意MRJP1基因的相对表达量显著高于平湖浆蜂和美意(P<0.05),而平湖浆蜂和美意之间无显著差异,说明蜂王浆产量高低与蜂群中工蜂个体分泌MRJP1的能力没有必然联系。MRJP1含量与其mRNA的的表达量相关性分析结果表明其相关系数为0.085,无显著相关。3.根据GenBank中西方蜜蜂(A.mellifera)MRJP1的DNA序列设计引物,采用PCR-SSCP技术对3个种群进行MRJP1基因多态性分析,共检测到3对引物有多态位点。其中,H5引物检测到2个单核苷酸变异位点,有三种基因型,均以B基因为优势基因,且B等位基因频率分别为0.766、0.55、0.833;W6引物检测到4个单核苷酸变异位点,有二种基因型,均以D基因为优势基因,且D等位基因频率分别为0.867、0.967、0.900;H6引物检测到8个单核苷酸变异位点,有三种基因型,均以E基因为优势基因,其中E等位基因频率分别为0.717、0.667、0.717。4. H5引物中由于碱基突变所产生的不同基因型在3个种群中的分布存在着差异,不同基因型的MRJP1含量也存在不同,且AB基因型中样本的MRJP1含量较大,与AA和BB基因型有显著的差异。而其它基因型在品系间和MRJP1含量中均无显著差异。因此,AB基因型可能是与MRJP1含量有正相关的有利基因型,可能作为今后筛选蜂王浆MRJP1高含量种群的一个候选基因型。