【摘 要】
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信号转导与转录激活蛋白I型（Signal transducers and Activators of transcription 1,STAT1）在哺乳动物上已经证明是一个非常关键且有效的抗病毒免疫蛋白,同时STAT1还具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。但迄今为止,关于STAT1的两个功能位点(Tyr701和Ser727)的具体作用机制以及功能位点对STAT1蛋白本身的影响研究还少有报道,在鸡
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信号转导与转录激活蛋白I型（Signal transducers and Activators of transcription 1,STAT1）在哺乳动物上已经证明是一个非常关键且有效的抗病毒免疫蛋白,同时STAT1还具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。但迄今为止,关于STAT1的两个功能位点(Tyr701和Ser727)的具体作用机制以及功能位点对STAT1蛋白本身的影响研究还少有报道,在鸡上更是空白。为了探究STAT1和两个功能位点在抗病毒中的作用以及对细胞增殖凋亡的影响,我们用poly I:C模拟病毒来干扰鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过对两个功能位点的点突变,构建单突变型STAT1（Y701F和S727A）和全突变型USTAT1（Y701F-S727A）质粒,利用CCK-8、Ed U、流式细胞术和荧光定量PCR（q RT-PCR）技术检测正常型STAT1和突变型STAT1对细胞增殖、凋亡和周期的影响以及抵抗抗病毒的作用。其结果如下:（1）将poly I:C作为病毒模拟转染到鸡DF-1细胞后,在4-72 h,与对照组相比,poly I:C组中STAT1的表达量均有增加,且在12-72 h,两组间的差异达到了显著或极显著（P＜0.05,P＜0.01）。同时,在72 h,poly I:C组中STAT1的表达量增至最高值,且细胞活力最低,这表明poly I:C作为病毒模拟的复合物感染DF-1细胞是有效且成功的,可以进行后续试验。（2）过表达STAT1后,增殖相关基因CYC和C-myc的表达量在24 h时显著低于对照组（P＜0.05）,抗凋亡相关基因BCL2、BCL-XL和MCL1的表达量在0-48 h时均有降低,且在24 h时,BCL-XL和MCL1的表达量极显著减少（P＜0.01）,促凋亡基因Caspase 3和Caspase 9在48 h和72 h的表达和72 h分别达到了极显著和显著高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）,抗病毒相关基因LGP2和OASL以及重要的免疫调控蛋白Myd88的表达都受到了抑制;而干扰STAT1后得到与过表达相反的结果。（3）过表达突变型STAT1（S727A）后,抗凋亡基因BCL2、BCL-XL和MCL1的表达量在24 h时均达到最高,且都高于其它各组并显著高于对照组（P＜0.05）。在72 h时,全突变型USTAT1组中BCL-XL的表达量和突变型STAT1（S727A）组中MCL1的表达量分别达到了最高值,且极显著高于对照组（P＜0.01）。同时,在48 h时,过表达USTAT1后,CYC、C-myc、LGP2和My D88的表达量均达到最高值,且极显著或显著高于对照组（P＜0.01,P＜0.05）,而过表达突变型STAT1（S727A）后,CYC和C-myc的表达量均最低,且与对照组差异不显著（P＞0.05）。（4）CCK-8、Ed U的结果表明,过表达正常型STAT1和突变型USTAT1后,鸡DF-1的细胞活力和Ed U阳性增殖细胞比例分别显著升高和降低（P＜0.05）;同时,我们通过流式细胞术检测发现,正常型和单突变型STAT1使更多的DF-1细胞处于G1期和G2期的数目显著增加,而全突变型USTAT1使更多细胞处于S期;正常型和单突变型STAT1使细胞早期、晚期和总凋亡率都高于对照组,而全突变型USTAT1使细胞早期、晚期和总凋亡率均略低于对照组,但差异不显著（P＞0.05）。综上所述,STAT1能有效抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,这个功能与它的Tyr701和Ser727两个位点是密不可分的。单突变型的STAT1（Y701F和S727A）功能活性相较于正常型STAT1均有所下滑,失去这两个功能位点的USTAT1几乎完全失去了功能活性,但也有部分试验结果发现USTAT1具有与正常STAT1相反的功能。
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