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目的1、探讨肝郁证对哮喘Thl7/Treg失衡及嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡的影响；2、研究柴朴汤对肝郁型哮喘Thl7/Treg失衡的影响；3、研究柴朴汤对肝郁型哮喘EOS凋亡及相关凋亡基因p53和bcl-2表达的影响。方法本研究分为两个部分：1、肝郁型哮喘大鼠模型的建立和评价：40只雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组、肝郁组和肝郁哮喘组。第一阶段：肝郁组和肝郁哮喘组于第1~28天予以28天慢性不可预见性应激的刺激（CUMS）；对照组和哮喘组不作特殊处理。第二阶段：哮喘组和肝郁哮喘组大鼠于实验第29天腹腔注射1ml抗原液（含10mg OVA、100mg氢氧化铝凝胶）初次致敏，实验第36天重复一次以加强致敏，对照组和肝郁组予以等量生理盐水代替。从第43天开始，将哮喘组和肝郁哮喘组大鼠置于雾化箱中，每天雾化吸入1%OVA20min，对照组和肝郁组以生理盐水代替雾化。采用Buxco动物呼吸功能测定系统，测量各组大鼠气道阻力；建模前后分别予以体征变化、蔗糖水消耗实验、开野活动度、强迫游泳实验等进行肝郁证模型评价；流式细胞技术检测肺泡灌洗液（BALF）中EOS的凋亡及外周血中T细胞亚群（Thl7/Treg）的比例；通过肺组织石蜡切片苏木素-伊红（HE）染色观察各组气道病理改变；用酶联免疫吸附测定法检测BALF中IL-17、IL-10含量。2、柴朴汤对肝郁型哮喘Thl7/Treg失衡、EOS凋亡及凋亡基因p53和bcl-2表达的影响：40只雄性清洁级SD大鼠按随机数字表法分为对照组、肝郁哮喘组、地塞米松组和柴朴汤组。按前述方法造模，在第二阶段每次超声雾化前30min，各组大鼠经灌胃给药，地塞米松组给予地塞米松0.001g/Kg，柴朴汤组给予柴朴汤3.20g/Kg，对照组和肝郁哮喘组予以等量生理盐水10ml/Kg。建模前后分别予以体征变化、蔗糖水消耗实验、开野活动度、强迫游泳实验等指标进行肝郁证模型评价；采用Buxco动物呼吸功能测定系统，测量各组大鼠气道阻力；流式细胞技术检测外周血中T细胞亚群（Thl7/Treg）的比例和肺泡灌洗液（BALF）中EOS的凋亡情况；用酶联免疫吸附测定法检测BALF中IL-17、IL-10含量。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织p53mRNA、bcl-2mRNA的表达；用免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中p53和bcl-2蛋白的表达。结果1、肝郁型哮喘模型建立的评价：肝郁哮喘组的体质量增长显著低于对照组，糖水消耗量、开野活动度试验水平活动得分、垂直活动得分均低于对照组，强迫游泳不动时间长于对照组，其差异均具有统计学意义（P<0.01）。哮喘组、肝郁哮喘组均表现出呼吸频率加快、节律不齐、出现点头呼吸，口周发绀，烦躁不安，其毛发无光泽、竖立，表明哮喘激发成功，肺功能测定哮喘组和肝郁哮喘组气道阻力均高于对照组（P<0.01）。肺组织HE染色显示哮喘组：气道及周围组织可见嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润，上皮细胞水肿、脱落；支气管黏膜及平滑肌增生，部分可见平滑肌破坏断裂，管腔内有分泌物。肝郁哮喘组：支气管小气道黏膜及平滑肌增生严重；可见平滑肌破坏断裂，部分小气道闭塞，炎性细胞浸润明显，肺泡内可见渗出物并呈扩张态。肝郁哮喘组和哮喘组炎性细胞总数（（96.86±4.43）×107/L、（88.22±3.22）×107/L）、嗜酸性粒细胞比例（（27.58±4.65）%、（22.67±2.43）%）、Th17细胞比例（（7.24±1.01）%、（6.11±0.78）%）和IL-17水平（（48.88±8.06）pg/mL）、（42.14±6.32）pg/mL）均高于对照组（（30.58±2.49）×107/L、（0.78±0.12）%、（2.80±0.41）%、（24.11±3.40）pg/mL）（P<0.01）；肝郁哮喘组和哮喘组Treg细胞比例（（3.09±0.55）%、（3.96±0.66）%）及IL-10水平（（19.79±2.80）pg/mL、（20.29±3.12） pg/mL）均低于对照组（（8.18±1.26）%、（30.79±5.22）pg/mL）（P<0.01）。肝郁哮喘组炎性细胞总数（96.86±4.43）×107/L、嗜酸性粒细胞比例（27.58±4.65）%及Th17细胞比例（7.24±1.01）%和IL-17水平（48.88±8.06）pg/mL均高于哮喘组（（88.22±3.22）×107/L、（22.67±2.43）%、（6.11±0.78）%、（42.14±6.32）pg/mL（P<0.05）；肝郁哮喘组Treg细胞比例（3.09±0.55）%低于哮喘组（3.96±0.66）%（P<0.05）。2、柴朴汤组大鼠体质量增长显著高于肝郁哮喘组，糖水消耗量、开野活动度试验水平活动得分、垂直活动得分均高于肝郁哮喘组，强迫游泳不动时间低于肝郁哮喘组，其差异均具有统计学意义（P<0.01），且与地塞米松组比较，其差异均具有统计学意义（P<0.05）。柴朴汤组Th17细胞比例（3.81±0.79）%低于肝郁哮喘组（7.79±1.61）%（P<0.01），且低于地塞米松组（4.76±0.84）%（P<0.05）；柴朴汤组Treg细胞比例（5.99±0.94）%高于肝郁哮喘组（2.92±0.48）%（P<0.01），且高于地塞米松组（5.02±0.80）%（P<0.05）。柴朴汤组和地塞米松组IL-17水平（34.88±7.06）pg/mL、（39.11±8.12）pg/mL均低于肝郁哮喘组（51.24±10.32）pg/mL；柴朴汤组和地塞米松组IL-10水平（35.79±8.80）pg/mL、（31.12±7.90）pg/mL均高于肝郁哮喘组（21.29±5.12）pg/mL。柴朴汤组Th17/Treg比例（0.64±0.36）低于肝郁哮喘组（2.53±0.68）（P<0.01），且低于地塞米松组（0.95±0.52）（P<0.05）。柴朴汤组BALF中EOS比例（6.58±3.65）%低于肝郁哮喘组（23.68±2.47）%（P<0.01）。柴朴汤组和地塞米松组EOS凋亡比例（15.60±2.01）%、（17.29±2.16）%均高于肝郁哮喘组（2.11±1.12）%（P<0.01）。肝郁哮喘组肺组织中p53mRNA的表达较对照组明显减弱（P<0.01），柴朴汤组和地塞米松组p53mRNA的表达则较肝郁哮喘组增强（P<0.05）。肝郁哮喘组肺组织中bcl-2mRNA的表达较对照组明显增强（P<0.01），柴朴汤组和地塞米松组bcl-2mRNA的表达则较肝郁哮喘组减弱（P<0.05）。Western blot显示肝郁哮喘组p53蛋白的表达较对照组明显减弱（P<0.01），bcl-2蛋白的表达较对照组明显增强（P<0.01），柴朴汤组和地塞米松组p53蛋白的表达较肝郁哮喘组增强（P<0.05），柴朴汤组和地塞米松组bcl-2蛋白的表达则较肝郁哮喘组减弱（P<0.05）。结论1、Th17/Treg失衡在哮喘的发病机制中起着重要的作用，肝郁证可通过增加Th17/Treg比例失衡、EOS的浸润从而加重哮喘。2、肝郁型哮喘以EOS浸润为主，且存在明显的Th17/Treg失衡。3、柴朴汤可通过纠正Th17/Treg比例失衡对肝郁型哮喘发挥重要的治疗作用。4、柴朴汤可通过促进p53的表达，从而下调bcl-2的表达，促进EOS的凋亡从而有效的控制肝郁型哮喘炎症。