氧化固醇蛋白家族(Oxysterol-binding Proteins,简称ORPs)是一类具有氧化固醇结合域的脂质结合蛋白家族,参与多种细胞活动过程包括信号转导、囊泡运输、脂类代谢、非囊泡甾醇转运等。OSBPL2是ORPs家族的成员,之前的研究发现其参与胆固醇的转运和脂质代谢,对其全面的功能研究尚未深入展开。本实验室发现该基因是耳聋新的致病基因,为进一步研究其分子机制,本研究利用CRISPR/Cas9技术高效构建了OSBPL2基因敲除HeLa细胞系并用这一成功构建的细胞模型进行功能探索。实验中发现,在转录水平和翻译水平上,OSBPL2基因敲除细胞系Bcl2/Bax比率显著上升,显示该细胞系的抗凋亡特征,暗示OSBPL2基因参与调控细胞凋亡过程。已知ORPs家族的成员氧化固醇结合蛋白(OSBP)能够参与ERK信号通路的调控,而且动物实验证明ERK信号通路对耳聋具有重要意义,为初步探索ERK信号通路是否与OSBPL2基因参与调控凋亡的特性相关,本研究还利用ERK信号通路抑制剂对敲除前后HeLa细胞进行处理,在翻译水平上,OSBPL2、Bax、Bcl2的表达没有明显的变化,但是对比未经敲除的野生型HeLa细胞,在未加U0126处理的敲除细胞中,出现p-ERK表达量上升,要探索ERK信号通路在OSBPL2参与凋亡调控活动中的作用,还需要更多的研究支撑。总之,上述实验表明CRISPR/Cas9技术能够高效构建OSBPL2基因敲除细胞系,该细胞系可能具有抗细胞凋亡的特征,OSBPL2基因可能参与了细胞凋亡调控,为该基因发挥功能分子机制的进一步研究提供了一定的理论依据。