论文部分内容阅读
恶性肿瘤已成为我国死亡率最高的疾病，近年来发病率有显著增高趋势。除了三大常规疗法，生物治疗为攻克肿瘤带来了新的希望。我们研究室经多年研究，在国际上首创了高效趋化抗原基因疫苗系统，本研究在分析了基因疫苗存在问题的基础上，应用前列腺癌趋化抗原基因修饰瘤苗，并通过阻断共抑制信号途径进行免疫治疗研究，分析抗肿瘤效应及相关机制，从而建立更为有效的联合免疫治疗肿瘤的新方案。联合治疗的策略是：将人前列腺特异膜抗原(hPSM)、小鼠前列腺酸性磷酸酶(mPAP)和人的前列腺特异抗原(hPSA)融合，称为3P抗原；以pcDNA3.1为载体，在3P的5′端连接次级淋巴组织趋化性因子(SLC)，而在其3′端连接人IgG的Fc基因，得到基因重表达质粒pSLC-3P-Fc，即趋化抗原基因疫苗；以转3P基因的B16F10细胞为前列腺癌小鼠模型；应用pSLC-3P-Fc质粒转染B16F10细胞(B16F10-SLC-3P-Fc)作为前列腺癌趋化抗原基因修饰瘤苗，同时联合应用anti-CTLA-4或anti-B7-H1抗体进行免疫治疗。实验结果显示，基因修饰瘤苗能诱导较强的抗肿瘤免疫反应，与anti-CTLA-4或anti-B7-H1抗体的联合应用可以进一步提高抗肿瘤免疫效应，显著地抑制肿瘤的生长同时延长荷瘤小鼠的生存期，并使大部分小鼠无瘤生存。CTL活性检测表明经免疫的小鼠脾细胞既可产生针对3P抗原特异性的CTL，也可产生针对野生型B16F10的细胞毒效应。再攻击实验证明联合免疫可诱导较强的免疫记忆。CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群的体内删除实验说明，在联合免疫治疗效应期CD8~+ T细胞发挥主要的抗肿瘤作用。研究结果表明，趋化抗原基因修饰细胞瘤苗结合共抑制分子通路的阻断作为联合免疫的治疗策略，可以增强免疫反应，并提高长期免疫效应。此外，我们以TC-1肿瘤为模型，研究了anti-CTLA-4和anti-B7-H1两种抗体联合应用的抗肿瘤效应，并初步探讨了作用机制。研究结果表明，两种抗体的联合应用可以产生协同抗肿瘤效应，提高针对TC-1肿瘤细胞的免疫排斥，其中CD8~+ T细胞在免疫反应中发挥主要的抗肿瘤作用。从PHA活化的健康中国人外周血淋巴细胞总RNA中，扩增人CTLA-4基因胞外区cDNA片段，将其与人免疫球蛋白IgG的Fc段重组连接，插入到pHIgV中，得到融合基因表达载体。应用脂质体方法转染真核细胞CHO-dhfr~-，氨甲喋呤(MTX)进行筛选，得到可以表达融合蛋白hCTLA-4-Fc的CHO-dhfr~-细胞，为CTLA-4相关的研究奠定基础。