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本研究以鲫(Carassius auratus)为试验对象,通过一系列试验条件如鲫淋巴细胞最适分离条件、MTT比色法试验最佳波长和鲫淋巴细胞最优培养条件的探索,建立了鲫淋巴细胞体外转化试验体系。在该试验体系中加入不同浓度的免疫多糖(酵母细胞壁),根据免疫多糖(酵母细胞壁)对转化率影响显著性水平的高低,能够快速、准确、客观地反映出免疫多糖(酵母细胞壁)效果的好坏。因此,该试验体系可以作为体外评价免疫多糖效果的一个新途径。本研究包括以下内容:通过调整淋巴细胞分离液中泛影葡胺(Urografin)的用量,发现采用比重为1.085的分离液在20℃800g离心20min的情况下,可将鲫外周血中的淋巴细胞有效地分离出来,每毫升外周血可分离到的淋巴细胞数量平均为4.88×10~6个,淋巴细胞回收率为76.21%~93.79%,平均为85.02%,细胞存活率大于或等于96%。本试验成功地建立了鲫外周血淋巴细胞的分离技术。通过对MTT比色法试验最佳波长的测定,表明鲫淋巴细胞悬液吸光值在450~700nm范围内的最大峰值在560nm,其次为570nm。本试验找到了鲫淋转试验中测定转化率的最佳波长。对影响鲫淋巴细胞体外转化的4个主要因素细胞浓度、植物血球凝集素(PHA-P)浓度、新生牛血清(NCS)添加量和培养时间进行正交试验、方差分析,表明这4个因素对鲫淋巴细胞体外转化影响均极显著(P<0.01),对鲫头肾和血液淋巴细胞转化的影响水平是一致的,最优水平组合均为淋巴细胞浓度为2.5×10~6个/mL、PHA-P浓度为12.5μg/mL、NCS添加量为25%、培养时间为72h。说明鲫淋巴细胞的来源虽然不同,但对促有丝分裂原的反应性和转化所需要的条件是一样的。在鲫头肾和血液淋巴细胞培养液中添加不同浓度的免疫多糖(酵母细胞壁)72h后,利用MTT比色法检测了免疫多糖(酵母细胞壁)对淋巴细胞转化率的影响,结果表明,70%和90%的免疫多糖(酵母细胞壁)对鲫头肾淋巴细胞转化率均有明显的影响,都是在添加量为20μg/mL时转化率最高,其中以90%的免疫多糖(酵母细胞壁)影响最为显著;对鲫血液淋巴细胞转化率也都有明显的影响,都是在添加量为40μg/mL时转化率最高,其中以70%的免疫多糖(酵母细胞壁)影响最为显著。当免疫多糖(酵母细胞壁)浓度高于或低于上述浓度时,鲫头肾和血液淋巴细胞转化率都有不同程度的下降,但当添加量达到1280μg/mL以上时转化率又有所升高。说明免疫多糖(酵母细胞壁)作为免疫刺激剂的添加量只有在适量的情况下,才能刺激淋巴细胞的分化增殖。