论文部分内容阅读
目的恶性神经胶质瘤是中枢神经系统(CNS)最常见和最致命的原发性恶性脑肿瘤,其特点是浸润性生长和早期转移。研究表明,恶性肿瘤的转移及侵袭过程受到长链非编码RNA和微小RNA的调控。本研究拟以胶质瘤细胞株U251为研究对象,探讨长链非编码RNA CRNDE与微小RNA miR-136在胶质瘤细胞U251中的调控关系及对胶质瘤细胞U251迁移、侵袭能力的影响,旨在为胶质瘤的临床诊断与治疗寻找新的思路。方法运用生物信息学的方法,分析TCGA数据库中的人胶质母细胞瘤与癌旁组织中差异表达的lncRNA并绘制热图,预测CRNDE和miR-136的潜在结合位点。使用小干扰RNA对胶质瘤细胞U251中的CRNDE进行特异性敲减,并通过qRT-PCR检测敲减效果及敲减后miR-136的表达量。实验分为:阴性对照组(NC)、小干扰RNA组(si-CRNDE)、miR-136抑制剂组(miR-136 inhibitor)及共转染小干扰RNA与miR-136抑制剂组(si-CRNDE+miR-136 inhibitor),划痕实验、Transwell实验检测四组细胞迁移、侵袭能力,western blot检测四组细胞上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达水平。结果(1)分析TCGA-GBM数据集,共得到1013个在胶质母细胞瘤组织和癌旁组织中差异表达的lncRNA,其中CRNDE在胶质母细胞瘤癌组织中相对于癌旁组织呈现高表达。starBase v2.0数据库分析显示CRNDE和miR-136-5P存在潜在结合位点。(2)转染小干扰RNA后胶质瘤U251细胞中CRNDE的表达量明显低于NC组,表明敲减成功,同时miR-136的表达量明显高于NC组。(3)划痕实验及Transwell实验结果显示,与NC组比较,si-CRNDE组划痕愈合面积较小,侵袭细胞数明显减少,而si-CRNDE+miR-136 inhibitor组划痕愈合面积、侵袭细胞数无显著差异;与si-CRNDE组相比,共si-CRNDE+miR-136 inhibitor组细胞划痕愈合面积显著增大,侵袭细胞数显著增多,挽救了敲减CRNDE后对细胞迁移、侵袭能力的影响。(4)Western blot结果表明,与NC组相比,si-CRNDE组N-cadherin和vimentin表达水平降低,E-cadherin表达水平增高,而si-CRNDE+miR-136inhibitor组E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平无明显差异;与siCRNDE组相比,si-CRNDE+miR-136 inhibitor组N-cadherin和vimentin表达水平增高,E-cadherin表达水平降低,挽救了敲减CRNDE后对EMT相关蛋白表达的影响。结论1.CRNDE在胶质母细胞瘤组织中相对于癌旁组织呈现高表达,CRNDE和miR-136存在潜在的结合位点。2.敲减CRNDE能通过促进miR-136的表达而降低胶质瘤U251细胞的迁移、侵袭能力,并影响EMT相关蛋白表达,且这些效应可被miR-136抑制剂逆转。