【摘 要】
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RNA干扰技术是基于dsRNA的序列特异性抑制基因功能的一种快速简便的方法,在基因功能研究和药物开发中得到了广泛应用。哺乳动物细胞体系中一般使用长度为21-23 nt的siRNA来
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RNA干扰技术是基于dsRNA的序列特异性抑制基因功能的一种快速简便的方法,在基因功能研究和药物开发中得到了广泛应用。哺乳动物细胞体系中一般使用长度为21-23 nt的siRNA来抑制靶基因的表达。目前有五种方法用于siRNA的制备,包括化学合成法、体外转录法、酶切消化法、表达载体法和表达框架法,其中化学合成法和表达载体法是目前应用最广泛的方法。表达载体法是利用载体中的RNA pol Ⅱ或Ⅲ启动子在细胞内驱动siRNA的高效转录。Pol Ⅲ启动子分为三类,其中2类启动子为基因内启动子,如tRNA启动子;3类启动子为基因外启动子,如U6和H1启动子。本实验中选择目前常用的几种启动子包括HU6、MU6、HH1、tRNAiMet、tRNA Val和CMVIE启动子,构建了各自驱动的表达载体用于shRNA的转录,并且通过比较这些载体对目的基因表达的抑制情况、转录能力和细胞定位等来分析不同启动子对RNAi效率的影响,以确定这些启动子应用于RNAi研究的前景和RNA干扰研究中启动子的选择提供一定的实验依据。
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