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目的：1.分离纯化大鼠睾丸间质细胞并进行原代培养。2.探讨肾上腺髓质素对大鼠睾丸间质细胞是否有保护作用。3.探讨肾上腺髓质素改善细菌脂多糖诱导的大鼠睾丸间质细胞功能障碍的分子机制。方法：1.每次取8只90天重约400g的成年雄性Sprague-Dawley大鼠,异氟醚麻醉后断颈处死,从阴囊中取得双侧睾丸,无菌条件下仔细去除睾丸被膜,勿损伤生精小管,放入50ml塑料杯中(每个杯子两个睾丸),胶原酶震荡消化分离后收集细胞液,用100μm尼龙滤网过滤,离心收集细胞后梯度Percoll液进一步获取高纯度的睾丸间质细胞,以台盼蓝染色法评价所得细胞活力,以3β羟基类固醇脱氢酶(3-β-HSD)细胞化学染色法鉴定所得细胞纯度。2.将睾丸间质细胞分离纯化后进行原代培养24小时,然后换成无血清培养基培养1小时,检测肾上腺髓质素在不同时间(0,6,12,18,24小时)和剂量(0, 10,50,100,300nmol/1)的影响,以确定肾上腺髓质素作用的最佳时间和剂量。将分离纯化的睾丸间质细胞进行原代培养24小时,然后换成无血清培养基培养1小时后以含不同浓度肾上腺髓质素的无血清培养基培养2小时,加入细菌脂多糖使其终浓度为1μg/ml,培养12小时后检测细胞活力,以检测肾上腺髓质素对细菌脂多糖诱导睾丸间质细胞损害的保护作用。3.将睾丸间质细胞进行原代培养24小时后,换无血清培养基培养1小时,然后将细胞分为5组：对照组(无血清培养基),细菌脂多糖组(1μg/ml的细菌脂多糖),肾上腺髓质素组(100nmol/1的肾上腺髓质素),肾上腺髓质素+细菌脂多糖组(100nmol/1的肾上腺髓质素＋1μg/ml的细菌脂多糖),肾上腺髓质素+细菌脂多糖+LY294002(PI3K抑制剂)组(100nmol/1的肾上腺髓质素+1μg/ml的细菌脂多糖+10μmol/1的[Y294002)。细胞培养12小时后检测活性氧簇,丙二醛,还原型谷胱甘肽及乳酸脱氢酶的浓度,线粒体膜电位,睾酮的浓度；检测白介素1,白介素6,诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶-2的基因表达水平；检测白介素1,白介素6,一氧化氮和前列腺素E2的浓度；检测凋亡细胞百分比,DNA片段及caspase-3活性；检测Bcl-2, Bax, caspase-3,多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly adenosine diphosphate-ribose polymerase, PARP)的基因表达水平；检测Bcl-2, Bax, pro-caspase-3, cleavd-caspase-3, PARP, cleavd-PARP的蛋白表达水平；检测总Akt及磷酸化Akt的蛋白水平。结果：1.分离纯化后的大鼠睾丸间质细胞活力可达95%以上,纯度可达90%以上,每次从16个睾丸中分离纯化出来的细胞数在24～32×106。2.肾上腺髓质素在浓度为100nmol/1及作用时间为12小时睾丸间质细胞的活力相对最好,在细菌脂多糖诱导后,肾上腺髓质素仍在100nmol/1的浓度时睾丸间质细胞的活力相对最好。3.肾上腺髓质素明显降低活性氧簇,丙二醛,还原型谷胱甘肽和乳酸脱氢酶的浓度,提高线粒体膜电位和睾酮浓度。肾上腺髓质素明显抑制白介素1,白介素6,诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶-2的基因表达水平。肾上腺髓质素明显降低白介素1,白介素6,一氧化氮和前列腺素E2的浓度。肾上腺髓质素明显减少凋亡细胞百分比,DNA片段浓度,caspase-3的活性。肾上腺髓质素促进Bcl-2基因的表达,但抑制Bax, caspase-3和PARP基因的表达。肾上腺髓质素促进Bcl-2蛋白的表达,但抑制Bax, pro-caspase-3, cleavd-caspase-3, PARP, cleavd-PARP蛋白的表达。肾上腺髓质素明显抑制细菌脂多糖所导致的磷酸化Akt的降低。结论：1.成功分离纯化大鼠睾丸间质细胞并进行原代培养。2.肾上腺髓质素能改善大鼠睾丸间质细胞的活力,并对细菌脂多糖诱导的睾丸间质细胞的损害有保护作用。3.肾上腺髓质素改善细菌脂多糖诱导的睾丸间质细胞的炎症和凋亡,可能通过磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B (PI3K/Akt)信号通路。