目的：研究中药香加皮提取物宝霍甙-Ⅰ体外对食管癌细胞株Eca-109的增殖、凋亡、细胞周期以及对Wnt/β-catenin信号转导通路相关基因的影响。为中药香加皮的进一步开发提供科学依据。 方法： 1采用MTT法分析不同浓度宝霍甙-Ⅰ作用不同时间后，对Eca-109细胞增殖反应的抑制作用，从而选择适当的药物浓度和作用时间。进行后续实验，分析宝霍甙-Ⅰ的抑瘤作用机制。 2采用逐步分离法对宝霍甙-Ⅰ抗肿瘤活性成分进行分离与纯化。采用柱层析和高效液相色谱法进行分离、纯化，应用薄层层析和电喷雾质谱分析进行成分鉴定。 3应用普通光学显微镜、电子显微镜观察经不用浓度宝霍甙-Ⅰ作用于Eca-109细胞48h后，对细胞的数量、形态、超微结构的影响。 4应用流式细胞术分析不同浓度(12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)宝霍甙-Ⅰ作用于Eca-109细胞48h后，对细胞周期和细胞凋亡的影响；并检测周期蛋白Cyclin B1的表达变化。 5用半定量RT-PCR法和流式细胞术研究经不用浓度(12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)宝霍甙-Ⅰ作用48h后，对Eca-109细胞Wnt/β-catenin信号转导通路中β-catenin基因、β-catenin/TCF及其下游基因Cyclin D1、Survivin mRNA和蛋白表达的影响。结果： 1.MTT检测结果显示，25μg/ml和50μg/ml的宝霍甙-Ⅰ作用Eca-109细胞48h后，能明显抑制Eca-109细胞的增殖，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)，并呈浓度及时间依赖性。而12.5μg/ml的宝霍甙-Ⅰ对Eca-109细胞未见明显抑制作用(P>0.05)。 2经高效液相色谱分析香加皮正丁醇部分有10个成分，其中流分2中有一个活性成分，电喷雾质谱分析结果显示，该种成分的分子量为514。经氢谱和碳谱(1HNMR和13CNMR)验证，并与文献比对，提示该种化合物为baohuoside-Ⅰ。 3经光学显微镜和电子显微镜观察发现，经25μg/ml和50μg/ml宝霍甙-Ⅰ作用Eca-109细胞48h后，细胞形态发生皱缩变圆，体积缩小，胞浆浓缩，胞核向外呈锐角突起，核染色质固缩浓聚呈块状，边集于核膜下，胞浆出现空泡，形成凋亡小体和多核瘤巨细胞；12.5μg/ml宝霍甙-Ⅰ作用后，Eca-109细胞的形态及超微结构与对照组相比没有明显变化。 4宝霍甙-Ⅰ作用48h时后，Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降(p<0.01)，G2/M期细胞比例明显增高(p<0.01)，25μg/ml和50μg/ml宝霍甙-Ⅰ处理组细胞与对照组相比有显著性差异，S期的比例降低，但变化不明显(P>0.05)。经宝霍甙-Ⅰ处理的Eca-109细胞中Cyclin B1蛋白的表达水平降低，25μg/ml和50μg/ml宝霍甙-Ⅰ处理组细胞与对照组相比均有显著性差异，12.5μg/ml处理组细胞细胞周期、Cyclin B1蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。 5宝霍甙-Ⅰ作用48h后，可诱导Eca-109细胞凋亡，25μg/ml和50μg/ml处理组细胞与对照组相比，有显著性差异(p<0.01)，并随宝霍甙-Ⅰ浓度的增加，细胞凋亡率明显增加，而12.5μg/ml处理组细胞与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。 6宝霍甙-Ⅰ作用48h后，Eca-109细胞β-catenin、CyclinD1和Survivin mRNA表达水平明显降低，β-catenin、Cyclin D1和Survivin蛋白表达水平也明显降低，25μg/ml和50μg/ml宝霍甙-Ⅰ处理组细胞显著低于对照组，有统计学意义(P<0.01)，而12.5μg/ml宝霍甙-Ⅰ处理组细胞与对照组相比无差异(P>0.05)。 结论： 1宝霍甙-Ⅰ在体外可明显抑制Eca-109细胞的增殖。 2香加皮正丁醇部分有一个活性成分，分子量为514。经氢谱和碳谱(1HNMR和13CNMR)分析证明，该化合物为baohuoside-Ⅰ。 2宝霍甙-Ⅰ可使Eca-109细胞形态和超微结构发生改变。 3宝霍甙-Ⅰ可使Eca-109细胞发生G2/M期阻滞，并可下调Eca-109细胞中Cyclin B1蛋白的表达。 4宝霍甙-Ⅰ可诱导Eca-109细胞凋亡，并呈剂量依赖性。 5宝霍甙-Ⅰ可下调Eca-109细胞Wnt/β-catenin信号转导通路中β-cateninmRNA和蛋白表达及β-catenin/TCF下游基因Cyclin D1、SurvivinmRNA和蛋白表达，提示其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。