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自噬是真核生物中高度保守的降解细胞内组分的物质循环过程,参与许多生理过程,如发育,衰老,非生物胁迫和抗病反应等。虽然已有很多研究发现自噬能被许多环境胁迫所激活,在动物中,AMPK感受细胞能量状态,在低能量时激活自噬。但是目前还没有研究报道过植物自噬的上游调控机制。本课题通过遗传学手段和生理生化技术,对拟南芥自噬起始机制进行了深入研究,主要的研究结果如下: 1.KIN10过表达延迟叶片衰老。在拟南芥中,KIN10-OE植株相对野生型表现出开花时间和叶片衰老延迟的现象。 2.KIN10过表达增强植物对营养缺陷和非生物胁迫的抗性。在黑暗处理后,KIN10-OE植株相对野生型的存活率更高;在氮元素缺乏条件下,KIN10-OE植株相对野生型的叶绿素含量更高;在干旱和水淹处理后,KIN10-OE植株相对野生型的存活率更高。 3.KIN10过表达提高自噬基因表达和ATG8蛋白积累。在正常条件下,KIN10-OE植株的自噬基因表达水平相对野生型更高;同时,在饥饿处理后KIN10-OE植株中ATG8蛋白含量和ATG8-PE脂化程度相对野生型更高。 4.KIN10过表达诱导自噬体形成。在正常条件和饥饿条件下,KIN10过表达植株中自噬体数目均相对野生型中更多,同时GFP-ATG8降解速率更快。 5.拟南芥KIN10-OE对营养胁迫增强的抗性依赖于自噬途径。遗传杂交表型分析显示KIN10-OE植物对营养缺乏增强的抗性在自噬途径缺失后消失,说明KIN10-OE植物增强的抗性依赖于完整的自噬途径。 6.KIN10与自噬蛋白相互作用。酵母双杂交分析发现KIN10能与自噬蛋白ATG1a,ATG1b,ATG1c和ATG13a相互作用;而且,KIN10是通过C端的调节结构域与自噬蛋白相互作用。 7.KIN10过表达能够提高ATG1的磷酸化水平。通过磷酸酶处理实验发现ATG1在拟南芥体内发生磷酸化,同时,KIN10过表达能够提高ATG1的磷酸化水平。 以上结果说明KIN10参与自噬途径并起到正调控作用,它通过提高ATG1磷酸化水平从而激活下游自噬途径。