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近年来,由于第三代头孢菌素和单环β-内酰胺抗菌药物的开发和广泛使用,许多细菌产生质粒介导的能水解头孢噻肟等第三代头孢及氨曲南等单胺类抗生素的超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs),尤其是CTX-M型ESBLs,呈逐年增加趋势。目前,CTX-M型ESBLs在世界各地广泛、快速的传播,甚至在局部地区出现爆发流行,逐渐成为许多国家ESBLs流行的主要类型,对人类的生命安全及防治动物疫病构成了很大的威胁。本试验目的是探讨鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药的分子机制及CTX-M型ESBLs基因传播扩散机制。通过ESBLs表型确证试验、药敏试验、耐药基因检测分析鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药的分子机制；通过PCR定位技术和分子克隆技术分析blaCTX-M的基因环境；通过质粒不相容群、ERIC-PCR和多位点序列分型(MLST)分析CTX-M型ESBLs分子流行病学特点。1、ESBLs表型确证试验表明,53株鸭源大肠杆菌中有34株为产ESBLs菌株。用微量稀释法测定34株鸭源大肠杆菌对头孢噻肟、头孢噻肟/舒巴坦、头孢他啶、头孢他啶/舒巴坦、头孢吡肟、卡那霉素、阿米卡星、四环素、多西环素、氟苯尼考、恩诺沙星和环丙沙星12种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC),结果显示79.4%(27/34)的菌株呈多重耐药性特点。34株ESBLs表型阳性菌PCR检测表明,33株菌携带有blaTEM-1基因；31株菌携带有6个不同blaCTX-M型基因：blaCTX-M-55(n=7), baCTX-M-79(n=8), blaCTX-M-65(n=9),blaCTX-M-14(n=3),blaCTX-M-27(n=2)和blaCTX-M-24(n=2);没有检测到SHV型ESBLs基因。2、blaCTX-M基因上游通常存在着插入序列ISEcpl和IS26,下游为IS903。通过定位PCR对34株菌进行扩增,在blaCTX-M-55、blaCTX-M-79、blaCTX-M-65、blaCTX-M-14、blaCTX-M-27和blaCTX-M-24上游均发现存在ISEcp1。插入序列ISEcp1包括右反向重复末端(1RR),-35(TTGAAA)和-10(TACAAT)启动子序列；不同的blaCTX-M基因亚型与ISEcp1的间隔区长度有差异,在42-266bp之间。此外,5株携带有blaCTX-M-65的菌中上游还发现IS26,IS26插入序列截断了ISEcp1在blaCTX-M-65、blaCTX-M-79、blaCTX-M-14、blaCTX-M-27和blaCTX-M-24下游发现IS903,blaCTX-M-55下游发现ORF477。上述基因环境序列全部已登录GeneBank,序列号分别为JX204385、JX290340、JX232215,、JX232216和JX306032-JX306038。对于没有扩增出ESBLs基因菌株,通过克隆性试验,我们得到一个基因序列全长为7853bp的新的基因组合片段,序列号为KC493654,其基因结构为：hypothetical protein-intl1-qacE△1-sull-orf5-IS26-blaTEM-1-DNA topoisomerase Ⅲ。3、质粒不相容群结果显示：大部分的菌株含有两个或两个以上的质粒不相容群,其中87.1%的菌株含有质粒不相容群FII。ERIC-PCR结果表明：31株携带有blaCTX-M菌株属于8个不同的克隆型(A、B、C、D、E、F、G和H),A(n=8)和E(n=8)是主要的克隆型,A型全部为CTX-M-65(n=8),E型包括CTX-M-79(n=5)和CTX-M-55(n=3)。MLST结果显示：31株携带有blaCTX-M菌株属于7个不同ST(ST10、ST2711、ST163、ST162、ST156、ST224和ST3085),ST10(11/31)是主要的克隆型,与CTX-M-65相关。ST3085是本次试验新发现的克隆型,已提交MLST网站。总之,CTX-M型ESBLs已在我国鸭源大肠杆菌中广泛流行。其原因主要有两个,一是不同的遗传元件与blaCTX-M基因转移有关,例如：ISEcp1和IS26,尤其是插入序列ISEcp1,不仅可以促使下游基因的转移,而且可以增强基因的表达；另一个重要原因是blaCTX-M基因的克隆传播和水平传播,克隆传播主要的克隆型为A、E和ST10。