甘蓝型油菜FT基因表达分析及A7-FT基因转录调控研究

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缩短甘蓝型油菜的生育期具有重要的战略意义和经济价值,使得早熟油菜育种的研究成为重点,由于油菜的开花期与成熟期关系密切,所以油菜开花的分子机制也成为了研究的热点。开花关键基因FT(FLOWERING LOCUS T)是光周期途径、春化途径、自主途径的信号整合因子,但是目前关于甘蓝型油菜FT基因的表达调控研究不完善。由于甘蓝型油菜FT基因具有多个拷贝,本文针对A7-FT基因开展研究。1.利用实时荧光定量技术(RT-qPCR)研究FT基因在不同品种(品系)不同时期的表达规律,结果发现不同品种(品系)甘蓝型油菜FT基因表达模式基本一致,呈先上升后下降趋势,且在花期FT基因表达量最大;在苗期、花芽分化期、蕾薹期、花期弱冬性材料103、104、1358的FT基因表达量均高于冬性较强的湘油15号和中双11号,角果FT基因的表达量与甘蓝型油菜的生态型无明显规律。2.通过PCR技术从甘蓝型油菜湘油15号基因DNA中获得A7-FT基因启动子序列。利用PLACE和PlantCARE在线工具对该段序列的顺式作用元件进行预测,结果表明,A7-FT基因启动子除了存在启动子核心元件TATA-box、CAAT-box,还有光应答、激素(脱落酸、水杨酸)、胚乳表达、抗逆性、生理控制相关的顺式作用元件。3.基于预测的顺式作用元件的分布情况,设计特异性引物,克隆不同片段长度启动子,与pCAMBIA1303载体构建5′段缺失载体,分别命名为M1、M2、M3、M4、M5。通过农杆菌介导拟南芥,GUS染色与脱色结果显示,在-1549~-238可能存在一些负调控元件的结合位点,而-238~+1区域是该启动子的核心区段。
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