免疫反应的发生首先是由抗原提呈细胞(Antigen-presenting cells，APC)捕获抗原，经其加工、处理将抗原信息提呈给T、B淋巴细胞，从而启动一系列的特异性免疫应答。因此，APC是免疫反应的重要环节，能否进行有效的抗原提呈直接关系到机体抗肿瘤免疫的效果。肿瘤的免疫逃逸机制主要在于APC功能缺陷、局部能被激活的淋巴细胞数量和功能不足及肿瘤细胞的低免疫原性和抗原调变能力，致使肿瘤抗原不能得到有效提呈，T细胞介导的免疫应答不能得到有效激活。故促进机体免疫系统对肿瘤抗原的提呈，提高局部活化的免疫效应细胞的数量和功能，以激发起强烈的抗肿瘤免疫效应，成为肿瘤免疫治疗中具有实际价值的研究方向。 树突状细胞(Dendritic cells，DC)是已知体内抗原提呈功能最强的APC，表达丰富的MHC分子、共刺激分子、粘附分子及高水平的TH1型细胞因子等，体内、体外均能激发T细胞增殖，诱导特异性CTL生成。实验发现肿瘤可引起DC功能失常、凋亡及免疫反应中信号传导障碍。以肿瘤抗原体外致敏DC，使之持续高水平地表达肿瘤抗原表位，并通过MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子途径有效地提呈抗原，然后将负载有肿瘤抗原的致敏DC回输荷瘤机体(ex vivo)，以诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫应答，是目前肿瘤免疫治疗的一条有效途径。近年来以DC为基础进行肿瘤疫苗的设计与应用已成 浙江大公俗 文 里大静 为肿瘤免疫治疗的研究热点，在该方面引人注目的研究工作是应用肿瘤抗原 肽、肿瘤细胞的蛋白提取物或肿瘤细胞的mRN体外冲击O＂ising）致敏DC， 然后将之回输或免疫接种至荷瘤宿主，进行肿瘤治疗。己证明此类疗法能产 生保护性免疫反应，但也存在某些不足，如应用肿瘤抗原肽和肿瘤提取物不 能使DC持续表达肿瘤抗原；需要大量瘤体组织以提取产物，限制了其在临 床的使用；肿瘤细胞蛋白提取物及InRN中成分复杂，其中也包括机体自身 的正常抗原，刺激DC免疫机体后存在着诱发自身免疫性疾病的潜在危险。 另有研究表明，肿瘤抗原的编码基因导入DC后能在DC内持续表达肿瘤抗 原及AlllC－抗原肽复合物，以克服抗原直接刺激DC、由于MHC－抗原肽复合 物解离或MHC分子降解对其诱导T细胞免疫应答所产生的不利影响。已有 实验结果显示将人黑色素瘤相关抗原P100基因转染鼠DC制成P100－DC 瘤苗，能诱导产生gpl00特异性CTh活性和保护性免疫反应，但对已形成肿 瘤的治疗作用效果仍欠佳。 因此如何进一步加强抗肿瘤免疫效应，提高肿瘤抗原基因转染DC瘤苗 的疗效具有重要的实践意义。肿瘤逃逸机体兔疫攻击的重要原因之一是肿瘤 微环境中的抗原提呈细胞及免疫效应细胞在数量和功能上的不足。研究发现 趋化因子能使淋巴细胞趋化到肿瘤局部，加强细胞免疫应答。tyllll）llotactlll Optu）是一种C亚家族趋化因于的唯一成员，可特异性趋化T细胞及NK细 胞。实验证实将共转染有Lptu和R毛基因的肿瘤细胞制成瘤苗免疫小鼠，T 细胞能被 Lptn趋化至肿瘤局部而被 APC激活，通过“吸引扩增”技术，提 高机体对肿瘤的免疫应答能力，有效杀伤肿瘤细胞。此外，对肿瘤兔疫逃逸 机制的研究还发现，肿瘤机体内存在着hlffllL漂移，表现为hl功能低下 而D丘型细胞因子占优势的状态，造成机体的细胞免疫受到抑制。己知白细 胞介素 18（Inteleukinl，IL－18）可显著诱导 hl型细胞因子（IF4、IL工等） 的产生，激活NK细胞、刺激T细胞增殖和增强CTL活性，因此针对肿瘤免 3 浙江大学谆士论文 里大静 疫原性低、局部APC和激活的T细胞数量少、hl型细胞因于不足。本课题 用重组腺病毒介导的Lptn或Kl吕基因修饰gpl00－DC瘤苗，研究此瘤苗对 黑色素瘤的免疫保护及免疫治疗作用，观察小鼠全身或肿瘤局部非特异性和 特异性免疫功能的变化，并行抗CD4”、抗CDS”、抗NKI＊单抗体内阻断试 验研究CD4＼细胞、CDS＋T细胞和NK细胞在此疗法中的作用机制，探讨 Lptu和 IL刁吕在肿瘤免疫反应诱导中的作用，探讨其抗肿瘤免疫机制。本研 究结果可望为肿瘤的免疫基因治疗提供新思路，开辟新途径，并为以后的临 床应用提供实验依据。 本研究分两部分： 第一部分：Lpophotootin基因修饰增强树突状细胞瘤苗的抗肿瘤作用及其机 制研究 提高肿瘤局部活化的免疫效应细胞的数量和功能，增强肿瘤兔疫原性， 是提高肿瘤兔疫治疗疗效的重要手段之一。L卯血仰砒加ho?