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目的： 1.建立含I-SCEⅠ酶切位点单链退火(single strant annealing，SSA)修复底物的稳定细胞株MCF7-SA。 2.探讨聚 ADP核糖基聚合酶1抑制剂(poly(ADP-ribose) polymerase1 inhibitors，PARP1i) Olaparib对DNA双链断裂(double strand breaks，DSBs)非同源末端连接（Non-homologous end joining，NHEJ）的影响。 3.探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor， HDACi) SAHA对DNA双链断裂NHEJ的影响。 4.探讨聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂 Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合用药对DNA双链断裂NHEJ的影响。 方法： 通过脂质体转染含Isce-I修复底物的线性化质粒，经过嘌呤霉素筛选，构建出SSA修复系统的稳定细胞株MCF7-SA，并通过流式细胞术对所构建的细胞株进行分析与鉴定；CCK-8检测试剂盒检测Olaparib和SAHA单独和联合用药对KU+/+中国仓鼠卵巢细胞CHO和KU-/-中国仓鼠卵巢细胞XRS5增殖的影响；免疫荧光测定γ-H2Ax foci来检测Olaparib和SAHA单独和联合用药是否诱导细胞产生DSBs；克隆形成实验检测Olapairb和SAHA单独和联合用药对DSBs修复的影响；细胞周期检测试剂盒来测定Olaparib和SAHA单独用药对CHO和XRS5细胞周期的影响；流式细胞仪定量检测Olaparib和SAHA单独和联合用药对NHEJ路径修复效率的影响；Real Time PCR及Western Bloting方法检测Olapairb和SAHA单独和联合用药，对DSBs各修复通路关键基因的mRNA以及染色体结合蛋白表达水平的影响。 结果： 1.建立并筛选整合有SSA修复底物的细胞株MCF7-SA。 2.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂 SAHA单独用药能够明显抑制CHO和XRS5细胞增殖，但是两者联合用药并没有产生协同作用的效果。 3.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独用药能够明显抑制CHO和XRS5细胞的克隆形成，两者联合用药对克隆形成的抑制作用明显大于单独用药时。 4.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独用药能够增加CHO和XRS5细胞内γ-H2Ax foci，两者联合用药时γ-H2Ax foci阳性细胞百分比明显大于单独用药时。 5.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib单独用药能够使CHO细胞G1、S期细胞减少，G2-M期细胞增加，对XRS5细胞周期无影响；组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独用药对CHO和XRS5细胞周期都不产生影响。 6.聚 ADP核糖基聚合酶1抑制剂 Olaparib单独用药对 KU+/+CHO细胞C-NHEJ途径无影响，对KU-/-XRS5 A-NHEJ途径呈明显抑制作用；组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独用药能够明显促进CHO细胞C-NHEJ途径和XRS5细胞A-NHEJ途径。两者联合用药，在CHO细胞内Olaparib能够部分抵抗SAHA对C-SNHEJ的促进作用，而在XRS5细胞内SAHA则能抵抗Olaparib对A-NHEJ的抑制作用。 7.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib不能降低PARP1基因mRNA的表达水平，但是能够使染色体上DSBs修复蛋白PARP1和DNA LigⅢ水平下调；组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA不能增加KU基因mRNA的表达水平，但是能够促进染色体上DSBs修复蛋白PARP1、KU、LigⅢ和LigⅣ的表达水平。两者联合用药对NHEJ途径相关染色体结合蛋白的影响呈现相互抵抗作用。 结论： 1.建立并筛选整合有SSA修复底物的稳定细胞株MCF7-SA，能够对SSA修复途径定量检测。 2.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib能够诱导细胞DNA损伤，产生DSBs；Olaparib对C-NHEJ修复途径不产生影响，能够明显抑制A-NHEJ修复途径。Olaparib抑制A-NHEJ途径，不是通过通过调节PARP1基因的表达水平实现，而是通过抑制关键蛋白PARP1的修复活性来执行。 3.组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA能够诱导细胞DNA损伤，产生DSBs；SAHA能够明显促进NHEJ修复途径，无论是C-NHEJ还是A-NHEJ。SAHA对NHEJ的作用不是通过调节DSBs修复关键基因的表达来实现，而是使修复蛋白容易穿梭到达DSBs损伤灶，从而提高NHEJ的修复效率。 4.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合用药，能够明显增加细胞内DSBs；这两者联合用药，Olaparib能够抵抗SAHA对C-NHEJ的促进作用，SAHA能抵抗Olaparib对C-NHEJ的抑制作用。 5.聚ADP核糖基聚合酶1抑制剂Olaparib和组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合用药对DSBs NHEJ的影响，是通过使染色体上NHEJ关键修复蛋白的表达水平相互抵抗来实现。