【摘 要】
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目的:采用免疫荧光细胞化学,RT-PCR和流式细胞术等方法检测人小细胞肺癌细胞株NCI-H446中葡萄糖调节蛋白78/94(GRP78/94)的表达与VP16诱导的细胞耐药的相关性及其机制。方法:
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目的:采用免疫荧光细胞化学,RT-PCR和流式细胞术等方法检测人小细胞肺癌细胞株NCI-H446中葡萄糖调节蛋白78/94(GRP78/94)的表达与VP16诱导的细胞耐药的相关性及其机制。方法:将细胞分为诱导组(加入A23187),抑制组(加入BAPTA-AM)和对照组(加入PBS),分别对细胞进行培养。采用免疫荧光细胞化学的方法检测细胞中GRP78/94的表达及分布,采用RT -PCR方法在核酸水平检测GRP78/94的表达并比较各组细胞间的表达差异,采用流式细胞仪对细胞进行周期分析。向各组细胞中加入相同浓度的化疗药物VP16,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,比较GRP78/94的表达与NCI-H446细胞对VP16耐药的相关性。结果:免疫荧光细胞化学结果显示:在NCI-H446细胞中可以检测到GRP78/94蛋白的表达,主要分布在细胞质及核周,并且诱导组较对照组的荧光强度明显增强。RT -PCR的结果显示:在核酸水平可检测到GRP78/94,而且诱导剂或抑制剂对其表达水平有影响,并呈现一定的浓度依赖关系,即随着诱导剂或抑制剂浓度的提高,GRP的表达增多或减少。细胞周期分析显示:诱导组细胞大多分布于G1期,S期和G2期相对减少,而抑制组G1期细胞减少,S、G2期相对增多。应用主要作用于S期和G2期的化疗药物VP16后,与对照组相比,诱导组的凋亡率明显降低,而抑制组明显升高,表明GRP78/94可能通过影响细胞的周期分布产生耐药性。结论:本研究表明,NCI-H446细胞的胞质及核周存在GRP78/94的表达,诱导剂(A23187)或抑制剂(BAPTA-AM)能够使GRP78/94的表达增多或减少。而且GRP78/94的表达水平影响细胞的周期分布,并与VP16诱导的细胞凋亡有关。GRP78/94可能是通过影响细胞周期,发挥对小细胞肺癌细胞的耐药作用,抑制其表达可能成为降低小细胞肺癌耐药性,提高对化疗药物敏感性的一条重要途径
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