扬子鳄雄激素受体cDNA序列的克隆、分析及其在不同组织中的定位与定量表达

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本文利用RT-PCR(reverse transcription PCR)、荧光定量PCR和免疫组织化学技术,研究了扬子鳄雄激素受体 cDNA序列的克隆、分析及其在不同组织中的定位与定量表达。  研究得到扬子鳄雄激素受体(Androgen Receptor,AR)的部分cDNA编码区序列。序列长为1625bp,包含终止密码子TGA,共编码441个氨基酸。结构上主要由NTD、DBD、LBD3个结构域组成,与其它脊椎动物一致。氨基酸同源性分析显示,扬子鳄AR氨基酸序列相对保守性。基于AR mRNA序列和蛋白序列分别构建系统发生树。结果显示,在爬行动物中,鳄类先与鸟类聚到一起,再与龟类形成姐妹群,最后其它爬行类相聚。这些结果与传统观点不一致,但是与现在许多从分子生物学角度探讨系统进化关系所得结果一致。对于鳄类的分类地位,鳄类与龟类、鸟类显示了更近的亲缘关系,这个结果与其它分子数据所得的结果一致。  荧光定量PCR和免疫荧光组织化学研究显示,AR在扬子鳄的不同组织如心脏、肝脏、肺、胃、胰脏、肾脏、脾脏、卵巢组织中的均有不同程度的定位与定量表达。定位结果与定量结果一致,都显示出 AR在被研究的组织中均有表达,但在不同组织中表达量不同,卵巢和肝脏的AR mRNA表达水平普遍偏高,其次是肺,其余几个器官的表达量较低且无明显差异。推测AR mRNA组织特异性表达情况与组织特异性功能有关。成年扬子鳄不同时期卵巢中的AR mRNA表达量相差较大,虽然这五个月份的雄激素受体表达量都较高,但7月份达到最高值,9月份次之,3月份和11月份它们的表达量仅仅是7月份表达量的一半,1月份表达量相对最少,而且AR都定位在不同卵泡时期的滤泡细胞中。推测AR的表达量与扬子鳄的生产生活状况紧密相关,在产卵期前后都降低,只在产卵期升高,在冬眠前后期较产卵前后期更低。
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