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MicroRNA(miRNA)是一类新发现的非编码小分子RNA,其长度为19到25个核苷酸。在真核生物中,miRNA对发育以及多种生理过程起着重要的调节作用。近年来,大量的研究报道表明miRNA与多种癌症的发生、预后、转移等相关,其中,miRNA在白血病发生及其治疗过程中的重要作用逐渐被发掘和报道。目前,miRNA与白血病的紧密相关性已被证实,但是,关于miRNA在小儿白血病中的表达、调控机制及临床意义远未被阐明。
前期miRNA芯片结果表明miR-128在小儿急性淋巴细胞白血病(actuelymphoblastic leukemia,ALL)中特异性高表达。为了进一步了解miR-128在小儿ALL中的作用,我们利用q-RT PCR方法检测miR-128在60份样品(包括28例初发、19例缓解、9例复发以及4例正常样本)中的表达量。结果表明:初发以及复发样品中miR-128表达量升高(相比于正常样品)。根据miR-128的表达量,结合临床资料(包括细胞分型、危险程度、疾病发生阶段等)做进一步分析,发现miR-128的表达与预后相关。其中与缓解相关的分析结果最为显著,初发组和复发组中的表达量远高于缓解组60倍以上,而初发组与复发组表达水平相当。此外,在复发组病人中,病例初发时的miR-128表达量比非复发组初发时的表达量高出8倍以上。miR-128在T-ALL中的表达量远高于B-ALL,超出10倍以上。临床生存统计还表明,高表达量的miR-128(>100 fold)无病生存周期明显缩短。这说明miR-128对临床预后具有重大意义,是临床诊断的潜在分子标记。
鉴于miR-128在小儿ALL表达谱的重要现象,我们对它在小儿ALL中的功能也做了进一步探索。首先,利用生物信息学软件分析,我们预测到干扰素调节因子-4(IRF4:Interferon regulatory factor4)是miR-128的重要靶基因,该基因是一种干扰素调节因子,参与B细胞和T细胞的成熟过程。这一预测也进一步得到实验验证。双荧光素酶报告基因检测系统结果显示,miR-128-PCD6.2表达载体和IRF4-psi-check2载体共转染HEK-293T细胞后,荧光素酶的活性明显下降,荧光值下降约60%。Western blot结果显示,转入miR-128 inhibitor后,IFR4蛋白明显降低。这些结果表明,IRF4是miR-128的下游靶基因。因此,我们推测,miR-128可能是通过调节IRF4而发挥其在小儿ALL中的作用。进一步开展miR-128作用机制的研究将为探索ALL的致病机制提供了新的视角。