钝顶螺旋藻藻蓝蛋白及其酶解产物的抗肿瘤活性研究

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螺旋藻是丝状的多细胞蓝藻,是当前国内外研究与开发规模最大的经济微藻。其中富含的藻蓝蛋白是具有荧光特性的一类生理活性蛋白,具有很高的理论研究与开发利用价值。藻蓝蛋白不仅可作为天然色素用于食品、化妆品等行业,而且因其具有提高机体免疫力、抗肿瘤、抗辐射、抗衰老和防治贫血等功效而广泛用于医药保健领域。同时,利用其特有的光滑雪活性制成的荧光分子探针和光敏剂,在临床医学诊断、免疫化学、生物工程及肿瘤激光治疗等领域也有很好的应用前景。本论文研究了顿顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化,藻蓝蛋白的稳定性,以及藻蓝蛋白和其酶解产物在抑制肿瘤细胞生长方面的生物活性。顿顶螺旋藻中的蛋白成分经固体硫酸铵沉淀,羟基磷灰石(HA)柱层析可得到纯品藻蓝蛋白。羟基磷灰石柱层析可把藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白分开,羟基磷灰石柱是分离纯化的关键。通过对藻蓝蛋白的稳定性进行实验研究,发现藻蓝蛋白在20℃和30℃时保持稳定,在40℃以上稳定性下降。在pH为7.0、8.0时,藻蓝蛋白稳定性良好。用MTT法研究表明,藻蓝蛋白和其胰蛋白酶酶解产物对人宫颈癌Hela细胞株的体外生长抑制作用有明显的剂量效应,当藻蓝蛋白的浓度达到100 mg/L时,其抑制率可达29.9%。酶解时间为1h、2h的酶解产物的抗肿瘤活性明显高于100 mg/L的藻蓝蛋白。比色法检测了Caspase-3活性的变化均较正常值有明显增高,在藻蓝蛋白作用Hela细胞12h后Caspase-3活性迅速增高并达到峰值,为对照组的5.70倍。推断其抗肿瘤的机制可能是通过启动Caspase途径从而诱导HeLa细胞的凋亡。
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