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向解除葡萄糖抑制的酵母细胞中(在非发酵碳源上生长或进入稳定期的细胞)加入葡萄糖对胞内合成cAMP产生刺激性的作用，使胞内cAMP水平短暂快速升高，依赖cAMP的蛋白激酶A(PKA)被激活，胞内发生蛋白磷酸化级联反应。葡萄糖作为信号分子由Cdc25/Ras/adenylyl cyclase信号通路介导，在这条信号通路中，Cdc25p是Rasp的鸟苷酸交换因子(GEF)，其功能是催化Rasp的GDP/GTP交换反应。已有研究表明：Cdc25p是一种磷酸化蛋白，葡萄糖诱导后，PKA被激活并将Cdc25p超磷酸化修饰；Cdc25p被磷酸化修饰后定位由胞膜向胞质迁移，与膜上Rasp的结合减弱。所有这些结果均表明：Cdc25p可能是PKA对胞内cAMP水平反馈抑制的靶标之一。但是，目前为止还没有证据证明Cdc25p的磷酸化修饰可以减弱其GEF活性，进而从合成水平上反馈抑制Ras-cAMP信号通路。本论文的主要内容是研究酿酒酵母PKA通过磷酸化修饰Cdc25p来反馈抑制Ras-cAMP信号通路的作用机制，通过体外实验证明了Cdc25p被磷酸化修饰后，其对Rasp的GEF活性减弱。同时，还对不同TPK基因产物通过磷酸化Cdc25p对Ras-cAMP信号通路的反馈抑制作用进行研究。
实验结果表明：PKA通过磷酸化修饰Cdc25p对Ras-cAMP信号通路反馈抑制，且这种反馈抑制作用并不依赖于Yak1，Tor1，Rim15，Sch9激酶。
在酿酒酵母细胞中，BCY1基因编码PKA的调节亚基，TPK1，TPK2和TPK3基因编码催化亚基。首先，我们构建不同PKA活性的突变株：敲除BCY1基因，并保留一个或两个TPK基因的突变株PKA活性高；同时敲除三个TPK基因和YAK1基因的突变株PKA活性低。实验结果表明：高PKA活性的突变株中，Cdc25p被超磷酸化修饰，胞内Ras2-GIP相对含量低，且单位质量Cdc25p结合的Ras2-GTP少；反之，低PKA活性的突变株中，Cdc25p不能被磷酸化修饰，胞内Ras2-GTP相对含量高，且单位质量Cdc25p结合的Ras2-GTP多。这些结果表明：酿酒酵母PKA对Ras-cAMP信号通路的反馈抑制机制之一是通过PKA对Cdc25p的磷酸化修饰从合成水平上反馈抑制Ras-cAMP信号通路。
体外实验结果表明：Cdc25p被磷酸化修饰后，其对Rasp的GEF活性减弱，揭示了PKA通过磷酸化修饰Cdc25p对Ras-cAMP信号通路反馈抑制的机制。
实验结果还表明：敲除BCY1基因后，三个TPK基因产物也分别能磷酸化修饰Cdc25p，并使胞内Ras2-GTP相对含量低，单位质量Cdc25p结合的Ras2-GTP少。由此揭示：在解除了BCY1基因产物对TPK基因产物的负调控作用后，TPK基因产物磷酸化修饰Cdc25p，从合成水平上反馈抑制Ras-cAMP信号通路。