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本研究构建了口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切肽介导的人白介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。首先克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切序列连接EGFP基因,构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pFIENβ,并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞,最后用RT-PCR技术和Western blotting检测hIL-2基因与EGFP基因的表达。可为利用乳腺生物反应器生产具有协同作用的蛋白奠定基础。本研究获得以下结果:1.成功从人血液中提取RNA,并经RT-PCR、PCR、连接转化等试验后成功克隆出hIL-2基因,经测序分析后,表明该基因没有发生突变,可以用于后续试验。2.构建了以β-酪蛋白启动子作为调控序列,含有hIL-2基因和EGFP基因乳腺特异性的共表达载体,经酶切及测序鉴定后,证明载体构建正确,可以进行后续试验。3.以奶山羊乳腺组织为材料,利用组织块贴壁培养法培养出原代山羊乳腺上皮细胞,利用已长出上皮细胞的组织块重新移入另外一个培养皿中,成功培养出了纯化的山羊乳腺上皮细胞,且细胞经传代培养后,生长旺盛,状态良好,可以用于细胞转染试验。4.利用脂质体对乳腺上皮细胞进行转染,筛选出适合山羊乳腺上皮细胞的转染时间,转染两天后,在荧光显微镜下观察,转染重组质粒的细胞部分发出荧光,证明转染成功。提取了细胞的RNA,在mRNA水平上对目的基因进行了检测,结果显示hIL-2基因和EGFP基因在mRNA水平上得到表达,但仍需进一步进行蛋白检测。Western blotting检测结果显示,hIL-2蛋白和EGFP蛋白在细胞内都有表达,但也检测到了hIL-2/EGFP融合蛋白的存在,说明FMDV 2A发挥了剪切作用,但剪切作用并不完全。