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猪体外受精(In vitro fertilization,IVF)和体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)技术已经得到了较广泛的应用,然而以上两种技术都需要经体外成熟(In vitro maturation,IVM)培养得到的处于减数第二次分裂的高质量MII期卵母细胞。但是用于IVM的卵母细胞主要来源于商业屠宰场的卵巢,而被屠宰的家畜携带病原体成为重要隐患。我们的监测数据显示,猪圆环病毒2型(PCV-2)在屠宰场来源的卵巢中感染率达77.5%,是屠宰场来源卵巢中的主要病原体之一。但是,PCV-2的感染在卵母细胞成熟和体外产生(In vitro production,IVP)胚胎中的特点和影响并不清楚。因此,本研究的目的是确定PCV-2在体外培养过程中的感染特点,并评价其是否影响卵母细胞体外成熟和体外生产(IVP)胚胎的发育。首先采用聚合酶链反应(PCR)检测了卵巢、卵泡液(Follicular fluid,FF)、卵母细胞、卵丘细胞和胚胎中PCV-2的DNA,同时探讨了病毒感染对卵母细胞成熟和体外生产的胚胎的发育影响。还通过绝对定量PCR检测了IVM和IVP过程中病毒的拷贝数并进行了分析。研究表明,卵巢中感染的PCV-2病毒亚基因型是2a。PCV-2a感染对卵巢和卵母细胞的形态和成熟无明显影响。此外,在体外生产的IVF的胚胎中病毒感染除了造成囊胚细胞数量减少外,对胚胎的发育没有显著影响。同时,在对体外生产胚胎发育过程中的各个时期PCV-2病毒拷贝数的检测表明,体外生产的胚胎和培养液中PCV-2病毒的拷贝数在不同的发育时期存在差异。由于卵母细胞、胚胎和培养液中的病毒会对体外胚胎生产、胚胎移植和克隆动物、疾病模型动物以及异种器官移植动物的生产造成生物安全隐患,因此,本研究在IVP的胚胎培养液中添加了抗病毒药物金刚烷胺和硒代蛋氨酸,并评价了在体外培养过程中药物添加对PCV-2复制的抑制作用。首先对PCV-2阴性的胚胎在体外胚胎发育过程中评价了金刚烷胺和硒代蛋氨酸的添加浓度,随后的药物添加实验结果显示,金刚烷胺和硒代蛋氨酸的添加在胚胎发育过程中能显著的降低PCV-2病毒在胚胎中的拷贝数,同时病毒的衣壳蛋白Cap蛋白的表达水平经药物处理后也出现了显著的下降。综上所述,本研究首次明确了PCV-2病毒在卵母细胞成熟和不同胚胎在发育过程中的病毒DNA拷贝数量的变化情况,发现卵泡液在卵母细胞成熟过程中会是病毒感染卵母细胞的潜在来源,同时在胚胎发育过程中,胚胎对病毒的易感性随着发育而增强,导致囊胚时期的胚胎中高含量的病毒DNA。随后的抗病毒药物添加实验结果显示,在胚胎培养液中添加金刚烷胺和硒代蛋氨酸可以作为降低感染病毒胚胎中PCV-2拷贝数的有效方法,并以此提高体外生产(IVP)胚胎的生物安全性。