论文部分内容阅读
本文以蓝狐(Alopex Lagopus)胆囊胆汁为实验材料,RP-HPLC法分析狐胆汁成分,探讨狐胆汁对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化损伤的作用。研究内容与方法：①采用正交试验优化狐胆汁RP-HPLC条件。②建立原代培养的乳鼠心肌细胞H202氧化损伤模型,不同浓度狐胆汁预处理心肌细胞后,MTT法检测细胞存活率。③采用生化方法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧酶(SOD)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的水平,分析狐胆汁对心肌细胞抗氧化损伤的作用。结果：①用色谱柱HypersiL BDS C18(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,V(甲醇)：V (30mmol/L磷酸二氢钾)=70：30的溶液(pH=3.8)为流动相进行等度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长为205nnm,柱温25℃,分离获得狐胆汁含牛磺胆酸和牛磺鹅去氧胆酸两种结合型胆汁酸,其峰面比分别为35.05%和9.23%,但未检测到游离型胆汁酸。各组分在3.33～10g/L范围内具有良好的线性关系。②MTT法检测细胞存活率,结果表明：随着H202浓度增加,细胞存活率逐渐降低,与H2O2呈浓度依赖关系。当H202浓度为400μmol/L,作用6h后,细胞存活率为57.78%,建立氧化损伤模型。不同浓度(100、200、400μg/mL)狐胆汁组与H202损伤组相比,其心肌细胞存活率显著高于H202损伤组(P<0.05)。③生化分析表明：H2O2诱导使细胞膜通透和脂质过氧化反应增强,培养液中LDH活性(136.31±18.94U/L)和细胞内MDA含量(28.53±0.46nmol/mgprot)分别显著高于对照组(42.24±2.143U/L,11.33±0.494nmol/mgprot),差异显著(P<0.05),细胞SOD活力(24.24±2.776U/mL)和GSH含量.(48.59±0.8392μmol/gprot)分别显著低于对照组(39.43±0.7404U/mL,59.85±1.751umol/grot)(P<0.05)。狐胆汁可显著降低H202所致LDH外漏和细胞内MDA含量,400μg/mL剂量组(LDH52.68±5.056U/L, MDA12.58±0.7049nmol/mgprot)、200μg/mL剂量组(LDH69.11±0.5021U/L, MDA13.59±0.4672μmol/gprot)和100μg/mL剂量组(LDH101.94±0.1980U/L, MDA16.12±0.2305μmol/gprot)显著低于H202损伤组(P<0.05)。狐胆汁可显著提高细胞SOD活力和GSH含量,400μg/mL剂量组(SOD36.81±0.5304U/mL, GSH56.77±1.619μmol/gprot)、200μg/mL剂量组(SOD35.10±0.6451U/mL, GSH54.46±0.9518)和100μg/mL剂量组(SOD31.84±0.2864U/mL, GSH51.92±1.023μmol/gprot)显著高于H202损伤组(P<0.05)。综上所述,高效液相色谱法能简单、快捷、有效地分离狐结合型胆汁酸,且狐胆汁具有抗H2O2诱导心肌细胞氧化损伤的保护作用。