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拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国青蟹的常见种,亦是华南地区主要的养殖蟹类。目前,缺乏相应的人工配合饲料,是制约拟穴青蟹人工养殖进一步发展的原因之一。研究青蟹的营养需求,对于开发营养均衡、成本经济以及环境友好的青蟹饲料有重要意义。脂肪是饲料中重要的组成成分之一,它不仅可以为甲壳动物提供能量和必需脂肪酸,也是生物膜结构的主要构成部分,参与体内脂溶性维生素转运,是类花生酸、激素和辅酶因子的前体物质。许多因素会影响动物对脂肪的利用,如脂肪的来源、脂肪的含量、脂肪酸的组成、饱和与不饱和脂肪酸的比例等。研究拟穴青蟹的脂肪营养代谢,有助于为拟穴青蟹人工配合饲料的研发提供数据参考,为甲壳动物脂质代谢提供理论资料。因此,本研究的主要目的是,通过测定饲料中不同脂肪源和不同脂肪水平对拟穴青蟹相关生理生化指标,探讨饲料脂肪源或脂肪水平对青蟹的影响;并通过分析测定摄食不同脂肪水平饲料青蟹的血清生化指标,探讨拟穴青蟹摄食后,其血液中脂质代谢情况;同时分析不同脂肪源和脂肪水平对拟穴青蟹FAS活性和mRNA相对表达的影响,以讨论饲料中脂肪源和脂肪水平对青蟹脂肪合成的影响。具体实验与结果如下: 1.不同脂肪源饲料对拟穴青蟹的影响 本实验将鱼油、猪油、红花油、紫苏籽油和混合油(鱼油:红花油:紫苏籽油=1:1:1)作为脂肪源,按8%添加水平,分别配制成五种等氮等脂的半纯化饲料,并用一种海洋双壳类动物,红肉篮蛤,作为对照组饵料(饲料分别命名字为FO、LD、SO、PO、MO和CF),饲喂拟穴青蟹幼蟹6周。实验青蟹分为6个处理,每个处理设三个重复,每个重复25只青蟹(初重7.43±0.32g,壳宽3.52±0.25cm)。结果显示MO处理组的青蟹存活率最高。饲喂SO饲料的青蟹粗蛋白和粗脂肪含量最低。肝胰腺总脂含量最高值出现在LD处理组,而肌肉总脂最高含量出现在FO处理组。LD处理组青蟹的血糖、总胆固醇和低密度脂蛋白含量较高,而高密度脂蛋白较低。青蟹组织脂肪酸的组成和所饲喂的实验饲料脂肪酸组成一致。饲喂LD饲料的青蟹生长状况、饲料利用指标以及血清中相关酶活性都明显较低。而肝胰腺的丙二醛含量以及抗氧化酶活性都在LD处理组有最大值。 2.不同脂肪水平饲料对拟穴青蟹的影响 本实验设计制作了五种实验饲料,通过饲喂拟穴青蟹幼蟹8周,然后从生长、饲料利用、体成分和抗氧化等指标来评价各实验饲料的效果,以确定拟穴青蟹幼蟹的脂肪最适量。这五种等氮等能的实验饲料(45%粗蛋白)分别添加0%,3%,6%、9%和12%的油脂(饲料分别命名为L0、L3、L6、L9和L12),随机饲喂五个处理组,每个处理设置三个重复,每个重复20只青蟹(初重11.53±0.52g,壳宽3.92±0.14cm)。结果显示L6处理组青蟹的存活率、终体重、终壳宽、特定生长率和蜕壳频率显著高于 L0、L3和L12。最高饲料转化率及最低蛋白质效率出现在L0处理组。L3处理组的青蟹日摄食率最高。全蟹的粗脂肪及肝胰腺总脂肪含量在各处理组中,随着饲料中脂肪含量的升高而明显增加。青蟹肝胰腺中饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸在 L0处理组所占比例最高。青蟹肌肉和肝胰腺中的脂肪酸组成与其饲喂的饲料中的脂肪酸相对应。L12处理组青蟹肝胰腺中积累的丙二醛含量高于其他处理组。抗氧化酶的活性随着饲料中脂肪含量的增加而增强。血液生化指标中总胆固醇和总蛋白在L3处理组有最大值,而血糖在L6处理组有最大值。血液中溶菌酶活性、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性在L9处理组达到最大值。 3.饲料脂肪水平对拟穴青蟹摄食后血清生化指标的影响 本实验用高、中、低三种脂肪水平饲料(L0,L6和L12)饲喂青蟹(初重20.33±0.76g,壳宽4.53±0.29cm)35天后,禁食24h,再投喂相应饲料,在摄食0h,12h,24h,36h,48h后,分别测定各处理组青蟹的血清生化指标,以探讨青蟹在饲喂不同脂肪水平饲料后,体内脂质代谢过程。结果显示,三个处理组的青蟹血糖在摄食后12h都达到最大值,之后浓度逐渐回落。L0和L6处理组在摄食后12h出现最大总蛋白(TP)值,而L12处理组TP在摄食后24h出现。血清中甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的影响不显著,仅见摄食后12h时,L6和L12处理组的总胆固醇明显高于L0处理组青蟹。L12处理组青蟹的谷草转氨酶(GOT)活性始终显著高于L0和L6处理组。而L0和L12同在摄食后24h出现最大GOT值。L12处理组的青蟹谷丙转氨酶(GPT)值同样始终显著高于L0和L6处理组。L6处理组的GPT和GOT各时段之间没有出现明显差异。 4.饲料脂肪源脂肪水平对拟穴青蟹FAS活性和mRNA表达的影响 本实验测定了拟穴青蟹肌肉和肝胰腺中脂肪酸合成酶(FAS)的相对表达量,并分析饲喂不同脂肪源或脂肪水平饲料对青蟹FAS活性和mRNA表达量的影响。结果显示,青蟹肝胰腺中FAS mRNA表达量显著高于肌肉组织。FO、MO和PO处理组的FAS活性与对照组CF青蟹没有显著差异。随着饲料中脂肪水平的升高,FAS活性和mRNA的相对表达量逐渐减低,FAS活性和mRNA的表达在L12处理组有最小值,而在L0处理组有最大值。 综上所述,本论文的研究结果显示: (1)与生物饵料相比,以鱼油和混合油作为脂肪源制作的颗粒饲料对拟穴青蟹幼蟹具有更好的生长作用,值得注意的是,在饲料加工过程中,饲料中n-6/n-3脂肪酸的比例应不大于1; (2)饲料中的脂肪水平为8.52%~11.63%(最适含量9.5%)时,可以使拟穴青蟹幼蟹维持稳定的生长和抗氧化能力; (3)高脂肪饲料可能会对青蟹肝胰腺结构造成损伤,从而影响其营养吸收和免疫能力。另外,低饲料脂肪水平对青蟹的生理健康同样会造成不利影响。 (4)拟穴青蟹肝胰腺中脂肪合成能力大于肌肉组织。饲料中的HUFA对拟穴青蟹FAS活性和mRNA相对表达的抑制作用最强,而饲料中高脂肪水平的抑制作用最明显。